[发明专利]哺乳动物组织中多潜能干细胞的分离培养

权利要求书

1.一种从哺乳动物组织中分离培养多潜能干细胞的方法，其特征是：

1)配液

培养液I：DMEM+1％L-谷氨酰胺+1％非必需氨基酸+1％丙酮酸钠+微量β-巯基乙醇+500u/ml LIF+5ng/ml bFGF，用0.22μm的滤器过滤，4℃保存；培养液II：培养液I+15％FBS；培养液III：培养液I+0.01％胰蛋白酶，用0.22μm的滤器过滤，4℃保存；

2)绵羊胎儿肾组织多潜能干细胞分离培养

无菌条件下，采用组织机械分离方法分离、培养绵羊胎儿肾组织原代细胞，培养液II37℃ 5％CO₂饱和湿度条件下培养48小时；待细胞克隆出现后用D-PBS洗3遍，而后加入培养液III，37℃ 5％CO₂饱和湿度条件下培养18小时；1500r/min×5min离心收集细胞，用培养液II悬浮细胞，吹均，以10⁵细胞/皿接种于6cm培养皿中，72小时后出现细胞克隆；传3～4代后冻存备用。