[发明专利]用于标记寡糖的荧光化合物及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种用于标记寡糖的化合物，特别涉及一种用于标记寡糖的荧光化合物。还涉及这种用于标记寡糖的荧光化合物的制备方法。

背景技术

文献1“Analytical Chemistry,69(15):2919-26;1997”公开了一种糖衍生化标记糖的方法，该方法采用还原胺化法，即糖链与铵盐离子和NaCHBH₃反应生成1-氨基-1-去氧糖醇，然后与荧光试剂FITC、PITC、TRSE反应，生成带有荧光标记的衍生化产物。该方法缺点是FITC、PITC、TRSE等荧光试剂可与样品中存在的非糖上的氨基反应，故该方法缺乏特异性，不能实现定量标记，并且糖的还原胺化，实验过程繁琐、且破坏了糖的结构。

文献2“Analytica Chimica Acta,609(1):66–75;2008”公开了一种标记糖的方法，该方法采用迈克尔加成法即在碱性条件下，糖与衍生化试剂如PMP发生迈克尔加成。该方法的缺点是两分子PMP和一分子糖加成，因此低聚糖的色谱特性占主导地位，可能不利于异构体的分离。

文献3“Analytical Biochemistry,376(1):1-12;2008”公开了一种标记糖的方法，该方法采用H₂O₂与CdSe/ZnS作用淬灭QDs的荧光，而达到检测葡萄糖的目的。GSH修饰的CdSe/ZnS与FITC标记的抗生素蛋白(avidin)通过辛二酸结合形成QDs-avidin-FITC,后者结合葡萄糖氧化酶获得葡萄糖探针。葡萄糖在葡萄糖氧化酶作用下产生H₂O₂，淬灭量子点荧光，因此实现检测葡萄糖的目的。该方法缺点是由重金属做成的荧光量子点具有一定的生物毒性。

文献4“Journal of Proteome Research,7(1):367-374;2008”公开了一种标记糖的方法，该方法采用同位素标记法，糖分子和带有同位素¹³C的小分子化学试剂通过化学反应与糖的某些基团相结合因此使糖带上¹³C，可用¹³C质谱仪进行检测和分析。该方法的缺点是采用了放射性元素，试验设备不符合标准以及实验者操作防护意识缺乏会对人体和环境造成危害。

发明内容

为了克服现有化合物用于标记寡糖时破坏糖结构、进而影响糖链性能的不足，本发明提供一种用于标记寡糖的荧光化合物。该荧光化合物由发光基团和标记基团两部分组成，发光基团是荧光素化合物母体，标记基团是苯甲醛的缩醛。根据苯甲醛的缩醛能选择性标记寡糖链上4,6位羟基的特性，进行寡糖链的标记，不破坏糖结构，不影响糖链的性能。

本发明还提供这种用于标记寡糖的荧光化合物的制备方法。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：一种用于标记寡糖的荧光化合物，其结构式是

式中，R₁是H、F、Cl、Br、甲氧基或者乙氧基的任一种；R₁是H、F、Cl、Br、甲氧基或者乙氧基的任一种。

一种上述用于标记寡糖的荧光化合物的制备方法，其特点是包括以下步骤：

（a）将4-甲酰基-3-甲基苯甲酸和含有取代基的间苯二酚按照摩尔比1:2～1:4进行研磨混合。

（b）在步骤（a）得到的混合物中加入甲基磺酸或者浓硫酸做催化剂，混合物与甲基磺酸或者浓硫酸的质量/体积比为1:4～1:8g/ml，搅拌均匀，得到透明溶液。

（c）将步骤（b）中所得透明溶液放入微波炉中，在功率400～1500w条件辐射1～20min，反应完毕后将反应混合物倒入冰水中，充分搅拌得到沉淀，抽滤，用0.1～0.3mol/L的稀盐酸洗涤，得到荧光素化合物粗产品。

（d）将粗产品利用色谱柱分离提纯，以200～300目柱层析硅胶为填料，以体积比v/v=1:1～1:6甲醇和三氯甲烷混合溶剂作为洗脱剂，分离得到荧光素化合物。