[发明专利]多头绒泡菌14-3-3蛋白单克隆抗体及其制备方法

权利要求书

1.一组分泌14-3-3蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株，其特征在于：该组杂交瘤细胞株McAbα+、McAbβ+或McAbγ+，其微生物保藏号分别是：CCTCC NO:C2012131、C2012132、C2012133，保藏地点：中国典型培养物保藏中心。

2.权利要求1的杂交瘤细胞株，其中该组杂交瘤细胞株是由表达抗体mAbα+、mAbβ+和mAbγ+的BALB/c鼠B淋巴细胞与NS-1骨髓瘤细胞融合后，经HAT培养液筛选和亚克隆制备而成的。

3.由权利要求1或2的杂交瘤细胞株所分泌的单克隆抗体。

4.权利要求3所述的单克隆抗体，其中所述单克隆抗体是mAbα+、mAbβ+和mAbγ+，其中，抗体mAbα+所识别的抗原决定簇肽段为MTHDESREDS；抗体mAbβ+所识别的抗原决定簇肽段为EQAERYDEMV；抗体mAbγ+所识别的抗原决定簇肽段为PKPVEDEAPA。

5.权利要求4中的抗体，其中：

①mAbα+、mAbβ+和mAbγ+的亚型均为IgG2b，效价为128000，且其与P14-3-3蛋白反应的亲和常数分别为：2.72×10⁸、4.26×10⁹和2.52×10⁸；

②mAbα+和mAbβ+能与酵母14-3-3蛋白Bmh1和Bmh2分别反应，以及能与40kD和48kD的人14-3-3蛋白分别反应。

6.制备权利要求1至5任一项所述的单抗的方法，包括如下步骤：

（1）腹水的制备：对上述己建株的杂交瘤细胞扩大培养；

（2）腹水中单克隆抗体效价的测定；

（3）单克隆抗体的筛选；

（4）单克隆抗体的纯化；

（5）单克隆抗体的鉴定。

7.权利要求1至6任一项所述的单抗用于研究多头绒泡菌或其他物种的P14-3-3蛋白的用途。

8.权利要求7的用途，其中所述的用途是研究P14-3-3蛋白随细胞周期以及生命周期的表达变化的用途。

9.一种由权利要求1或2的杂交瘤细胞株所分泌的单克隆抗体，其特征在于：

mAbα+的轻链、重链可变区肽段的氨基酸序列选自SEQ ID NO:2、4；

mAbβ+的轻链、重链可变区肽段的氨基酸序列选自SEQ ID NO:6、8；

mAbν+的轻链、重链可变区肽段的氨基酸序列选自SEQ ID NO:10、12。

10.权利要求9的抗体，其中抗体包括所述轻链或重链的氨基酸序列经过1～10个氨基酸残基的取代、缺失或添加并对14-3-3蛋白具有特异的靶向性，具有影响14-3-3蛋白功能的抗体。