[发明专利]液相色谱仪用内嵌三嗪环酰胺硅胶固定相及制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种液相色谱固定相，尤其是一种键合量高、键合层稳定，同时包含三嗪环和酰胺两种极性官能团的液相色谱仪用内嵌三嗪环酰胺硅胶固定相及制备方法。

背景技术

高效液相色谱是目前发展最快、应用最为广泛的一种分析分离技术，它以高灵敏度、高选择性、高柱效、重复性好和操作简便等特点，在化学、医药、食品、环保、生化及工业制备等众多领域扮演着越来越重要的角色。色谱分离的核心是色谱柱，而色谱柱的填料又是最为关键的部分。十八烷基键合硅胶（ODS）以其柱效高、稳定性好、适用范围广、使用方便而成为“广谱型”固定相，但是其对于强极性和碱性的有机小分子化合物的分离存在一定的问题。对于强极性化合物，其在反相色谱固定相上的保留很小；而对于碱性化合物，由于固定相上残余硅羟基的存在，使碱性样品的保留时间变长、峰形变宽、拖尾。虽然用离子对试剂对分析物进行衍生化可以提高分析物的保留，改善分析物的拖尾，但是离子对试剂的加入会抑制质谱的信号，降低分析物质谱检测的灵敏度。

近年来，为解决常规十八烷基键合固定相在分离中的缺陷，关于高选择性的色谱固定相的研制及开发成为色谱领域研究的核心内容之一。其中，具有多种分离机理的色谱固定相越来越受到人们的关注。相对于单一模式的色谱固定相只有一种色谱保留机理，此类新型固定相由于嵌入特殊基团而具有多种保留机理，进而可以提供更好的分离选择性。极性官能团的嵌入，一方面可以解决反相色谱中在高的水相中不能润湿固定相孔道的问题，改善分析物在固定相中的传质，增加固定相与分析物的相互作用；另一方面，嵌入的极性官能团与分析物质之间除常见的疏水作用外，还存在着π-π作用、偶极—偶极等多种作用力。

在国内，黄晓佳等人首次在固定相的烷基链中包埋酰胺基团，所得到的固定相在分离碱性化合物时取得了良好的分离效果。酰胺具有良好的亲水性和极性，且属于中性基团，稳定性良好，十分适合作为极性基团嵌入烷基链中制备固定相。之后Rosely等人以异氰酸丙基三乙氧基硅烷和十八硫醇反应制得内嵌硫代氨基甲酸酯官能团的固定相，将其用于分离阿米替林类强碱性抗抑郁药时表现出完美的峰形。但是，上述包埋极性官能团固定相多为嵌入单一的极性基团，在改善碱性化合物拖尾方面取得进展，但对于复杂样品体系如结构相似物或同分异构体的分离中并未表现出良好的分离效果。

发明内容

本发明是为了解决现有技术所存在的上述技术问题，提供一种键合量高、键合层稳定，同时包含三嗪环和酰胺两种极性官能团的液相色谱仪用内嵌三嗪环酰胺硅胶固定相及制备方法。

本发明的技术解决方案是：一种液相色谱仪用内嵌三嗪环酰胺硅胶固定相，其特征在于：所述固定相的结构式为：

。

一种上述液相色谱仪用内嵌三嗪环酰胺硅胶固定相的制备方法，其特征在于依次按如下步骤进行：

a.  酸化多孔硅胶；

b.  在惰性条件下，γ-氨丙基三乙氧基硅烷与经酸化的多孔硅胶及甲苯进行反应，制得γ-氨丙基三乙氧基键合硅胶；

c.  在惰性条件及缚酸剂保护下，γ-氨丙基三乙氧基键合硅胶与三聚氯氰进行反应，制得中间产物A；

d. 在惰性条件下，中间产物A与乙二胺及甲苯反应，制得中间产物B；

e.  在惰性条件及缚酸剂保护下，中间产物B与十二酰氯及甲苯进行反应，制得固定相。

所述a步骤是称取硅胶浸入盐酸溶液中，超声分散均匀后于110℃下回流搅拌12 h~18 h，过滤，用水洗涤至中性，再用无水乙醇洗涤，140 ℃条件下真空干燥12 h；所述硅胶与盐酸溶液的用量比例为1g：20ml；所述盐酸溶液是浓HCl的水稀释液，浓HCl与水的体积比为1：1。

所述b步骤是将酸化后的硅胶置入容器中，氮气保护下加入甲苯，搅拌混合均匀后缓慢加入γ-氨丙基三乙氧基硅烷，110 ~120℃油浴电磁搅拌12 h~24 h，之后依次用甲苯、甲醇、二氯甲烷洗涤抽滤，60℃真空干燥12 h得到γ-氨丙基三乙氧基键合硅胶；所述酸化硅胶与甲苯用量比为1g：10ml；所述酸化硅胶与γ氨丙基三乙氧基硅烷物质的量之比为1：1.2~2。