[发明专利]一种利用三维序贯共培养进行胚胎体外培养的方法有效
申请号: | 201310171828.9 | 申请日: | 2013-05-06 |
公开(公告)号: | CN103232970A | 公开(公告)日: | 2013-08-07 |
发明(设计)人: | 宋宇轩;曹斌云;安小鹏 | 申请(专利权)人: | 西北农林科技大学 |
主分类号: | C12N5/073 | 分类号: | C12N5/073 |
代理公司: | 暂无信息 | 代理人: | 暂无信息 |
地址: | 712100 *** | 国省代码: | 陕西;61 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 利用 三维 序贯共 培养 进行 胚胎 体外 方法 | ||
1.一种利用三维序贯共培养进行胚胎体外培养的方法,其特征在于,该方法包括以下步骤:
步骤一、制备I型液态鼠尾胶原;
步骤二、分离新西兰大白兔的输卵管上皮细胞,接种于I型液态鼠尾胶原上,培养建立输卵管上皮细胞的三维培养体系;
步骤三、分离新西兰大白兔子宫内膜上皮细胞,接种于I型液态鼠尾胶原上,培养建立子宫内膜上皮细胞的三维培养体系;
步骤四、倾去输卵管上皮细胞的三维培养体系中的培养液,换成CZB为培养液,将小鼠受精卵置于输卵管上皮细胞的三维培养体系培养;
步骤五、倾去子宫内膜上皮细胞的三维培养体系中的培养液,换成CZB为培养液,将发育至桑葚胚阶段的小鼠胚胎转入子宫内膜上皮细胞的三维培养体系中培养。
2.如权利要求1所述的利用三维序贯共培养进行胚胎体外培养的方法,其特征在于,分离获得的新西兰大白兔的输卵管上皮细胞接种后采用DMEM培养液进行培养,培养时间为2-3天。
3.如权利要求1所述的利用三维序贯共培养进行胚胎体外培养的方法,其特征在于,分离获得的新西兰大白兔子宫内膜上皮细胞接种后采用DMEM培养液进行培养,培养时间为2-3天。
4.如权利要求1所述的利用三维序贯共培养进行胚胎体外培养的方法,其特征在于,小鼠受精卵置于输卵管上皮细胞的三维培养体系中培养时间为24-30小时。
5.如权利要求1所述的利用三维序贯共培养进行胚胎体外培养的方法,其特征在于,桑葚胚阶段的小鼠胚胎转入子宫内膜上皮细胞的三维培养体系中培养至囊胚阶段。
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