[发明专利]禽流感病毒NS1蛋白B细胞抗原表位多肽及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及抗原表位多肽，尤其涉及禽流感病毒NS1蛋白B细胞抗原表位多肽，本发明还涉及该抗原表位多肽在制备诊断或检测禽流感病毒感染药物中的应用，属于分子免疫学领域。

背景技术

禽流感（Avian influenza，AI）是由正粘病毒科流感病毒属A型AI病毒(AIV)所引起的一种禽类传染病。根据致病力不同AIV可分为高致病性（HPAIV）、低致病性(LPAIV)。近年来HPAIV在全球范围内呈现流行态势。

疫苗免疫接种是预防禽流感传播的有效措施。然而疫苗的大范围使用，免疫鸡群血清学阳性率极高，与病毒感染途径引起的血清学阳性相混淆。这两种途径发生的血清学改变，除疫苗本身带有特定标记或者采用亚单位疫苗外，通过现有的血清学检测技术，如血凝抑制试验、ELISA、琼脂扩散实验等均不能鉴别疫苗免疫与病毒感染，给禽流感的监控工作带来一定困扰，因此很多研究开始关注禽流感感染和免疫的鉴别(Differentiation of infected and vaccinated animals)方法研究。

AIV属于单股负链RNA病毒，由8个节段组成，分别编码血凝素（HA）、神经氨酸酶（NA）、聚合酶蛋白（PA、PB1、PB2）、核蛋白（NP）、基质蛋白（M）、非结构蛋白（NS）。NS基因具有两个ORF，ORF1编码202～237个氨基酸的NS1蛋白（约为26ku），ORF2编码121个氨基酸的NS2蛋白（约为14ku）。NS在感染早期大量合成，存在于细胞核内，不存在于成熟的病毒粒子中，NS1蛋白属于非结构蛋白，可以利用NS1蛋白作为检测抗原对免疫鸡群中野毒感染和灭活疫苗产生的抗体进行鉴别检测。因此，目前对流感病毒感染和免疫的鉴别研究主要集中在NS1蛋白上（郭莹莹，吴春艳，王靖飞.禽流感分离株GD/1/96(H5N1)非结构蛋白结构建模[J].中国预防兽医学报，2010，03:171-174；Avellaneda G,Mundt E,Lee C W,et al.Differentiation of infected and vaccinated animals(DIVA)using the NS1protein of avian influenza virus[J].Avian Dis,2010,54(1Suppl):278-286.）。

MAb结合噬菌体随机展示肽库技术是目前应用最广、发展最快的抗原表位筛选平台之一。该技术已成功应用于多种病原微生物抗原表位的分析。与其他抗原表位的分析方法相比，它快速、便捷，既可分析线性表位，又可分析构象表位或是与构象表位功能相同的模拟表位。目前，已经鉴定的流感病毒抗原表位多数来源于人源H1N1和H3N2病毒株，而对H5亚型禽流感的抗原表位研究基本处在空白之中，特别是尚未见到国内外有利用噬菌体展示肽库技术分析H5N1亚型禽流感NS1蛋白抗原表位的相关报道（Akifumi Yamashita,Norihito Kawashita,Ritsuko Kubota-Koketsu,et al.Highly conserved sequences for human neutralization epitope on hemagglutinin of influenza A viruses H3N2,H1N1and H5N1:implicationfor human monoclonal antibody recognition[J].Biochemical and Biophysical Research Communications,2010,393:614-618.）。

因此，本发明人开展了NS1抗原表位的鉴定工作，以期能够为进一步建立高效的检测禽流感的方法提供理论依据。

发明内容