[发明专利]一种大黄鱼抗菌肽hepcidin基因酵母表达产物及其制备方法与应用

说明书

技术领域

本发明涉及大黄鱼抗菌肽基因，尤其是涉及一种大黄鱼抗菌肽hepcidin基因酵母表达产物及其制备方法与应用。

背景技术

Hepcidin是近年来新发现的一类具有独特性质的小分子抗菌肽。Krause等（1.Krause A,Neitz S,,et al.LEAP-1,a novelhighly disulfide-bonded human peptide,exhibits antimicrobial activity[J].FEBS Lett,2000,480:147-150）首次从人血液中分离纯化了这条多肽，并将其命名为肝脏表达的抗菌肽(LEAP1)。随后，Park等（2.Park CH,Valor EV,Waring AJ,etal.Hepcidin,a urinary antimicrobial peptide synthesized in the liver[J].J BiolChem,2001,276(11):7806-7810）将从人尿分离的这条多肽命名为hepcidin，此后一直沿用此名称。目前，从多种哺乳动物及鱼类中已成功克隆到hepcidin基因。与其他抗菌肽不同，hepcidin在各物种间具有较高的结构保守性，在成熟肽区域中富含8个半胱氨酸，可形成4对二硫键，使其分子结构高度紧缩（3.Hunter HN,Fulton DB,GanzT,et al.The solution structure of human hepcidin,a peptide hormone with antimicrobial activity that is involved in iron uptake and hereditary hemochromatosis [J].J BiolChem,2002,277(40):37597-37603）。研究表明，hepcidin具有广泛的抗细菌、病毒、真菌和原生动物活性（4.Cuesta A,MeseguerJ,Esteban MA.The antimicrobial peptide hepcidin exerts an important role in the innate immunity against bacteria in the bony fish gilthead seabream[J].Mol Immunol,2008,45(8):2333-2342）。

本申请人（5.Zheng W，Liu G，Ao J，et al.Expression analysis of immune-relevant genes in the spleen of large yellow croaker(Pseudosciaenacrocea)stimulated with poly I:C[J].Fish Shellfish Immunol，2006，21(4):414-30）前期通过对病毒类似物poly(I:C)诱导大黄鱼脾脏组织cDNA文库的表达序列标签（expressed sequence tag,EST）分析，发现了多条编码大黄鱼抗菌肽hepcidin 的EST序列。已经报道，真鲷Pagrosomus major、鲈鱼Lateolabraxjaponicus、石斑鱼Epinephelusdrummondhayi、黑鲷Sparusmacrocephlus等鱼种hepcidin基因均存在多态性现象（6.王克坚，海洋鱼类和青蟹抗菌肽hepcidin和scygonadin的研究[J].厦门大学学报(自然科学版)，2011，50(2)：418-424），这与人类及其他哺乳类动物只存在一个hepcidin基因(除鼠具有两个hepcidin基因外)存在显著不同，这种现象反映出鱼类在复杂的水体环境下可能需要多个hepcidin基因拷贝来参与自身的免疫防御反应（7.Huang PH,Chen JY,Kuo CM.Three different hepcidins from tilapia,Oreochromismossambicus:analysis oftheir expressions and biological functions[J].MolImmunol,2007,44(8):1922-1934），也说明了hepcidin可能是鱼类重要免疫防御因子。