[发明专利]银杏内酯注射液及含量测定方法

权利要求书

1.银杏内酯注射液的检测方法，其特征在于检测的项目和方法如下：

(1)蛋白质：取银杏内酯注射液2ml，加水制成50ml，作为供试品溶液，称取考马斯亮蓝G-250约50mg，溶于25ml乙醇中，再加入85％(w/v)的磷酸50ml，加水稀释至500ml，摇匀，过滤，精密量取滤液5ml置试管中，再加入1ml供试品溶液，摇匀，放置3min，同法做空白，于595nm波长下，测定吸光度，供试品溶液吸光度小于0.05；

(2)鞣质：取蛋白质检查项供试品溶液1ml加入稀醋酸1滴，再加明胶氯化钠试液5滴，摇匀，放置10分钟，未出现浑浊或沉淀；

(3)树脂：取蛋白质检查项供试品溶液5ml，加盐酸1滴，放置30分钟，无树脂状物质析出；

(4)草酸盐：取蛋白质检查项供试品溶液2ml，用稀盐酸调节pH值至1～2，滤过，滤液用氨水调节pH值为5～6，加3％氯化钙溶液3滴，放置10分钟，未出现浑浊或沉淀；

(5)钾离子：取蛋白质检查项供试品溶液2ml，置10ml纳氏比色管中，加碱性甲醛溶液0.6ml、3％EDTA溶液2滴、3％四苯硼钠溶液0.5ml，加水稀释至10ml，另取标准氯化钾溶液0.8ml，同法试验，浊度低于对照溶液。

2.银杏内酯注射液中有效成分含量的测定方法，其特征在于：

色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以25∶10∶65甲醇-四氢呋喃-水为流动相；用蒸发光散射检测器，漂移管温度：105℃；载气流速：3.00L/min；柱温：40℃；理论板数按白果内酯峰计算应不低于2500，白果内酯峰与银杏内酯C峰的分离度应大于1.5；

对照品溶液的制备：分别精密称取白果内酯对照品、银杏内酯A对照品、银杏内酯B对照品、银杏内酯C对照品适量，加甲醇制成每1ml分别含0.15mg、0.12mg、0.1mg、0.1mg的混合溶液，摇匀，作为对照品溶液；

供试品溶液的制备：精密量取银杏内酯注射液1ml，加磷酸盐缓冲溶液14ml，摇匀，上Extrelut-20柱，吸附15分钟，用乙酸乙酯100ml洗脱，收集洗脱液，于水浴上蒸干，残渣用流动相溶解并转移至10ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，用0.45μm微孔滤膜滤过，作为供试品溶液；

测定法：分别精密吸取对照品溶液10μl、20μl和供试品溶液15μl，注入高效液相色谱仪，记录色谱图，用外标两点法对数方程分别计算白果内酯、银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C的含量。

3.根据权利要求2的银杏内酯注射液中有效成分含量的测定方法，其中供试品溶液的制备步骤中所加的磷酸盐缓冲溶液的pH为6.5。

4.根据权利要求3的银杏内酯注射液中有效成分含量的测定方法，其中所测定的银杏内酯注射液每1ml含银杏萜类内酯以白果内酯(C₁₅H₁₈O₈)、银杏内酯A(C₂₀H₂₄O₉)、银杏内酯B(C₂₀H₂₄O₁₀)和银杏内酯C(C₂₀H₂₄O₁₁)的总量计，含量为1-10mg/ml，优选4.25～5.75mg。