[发明专利]一种中药的膜富集方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种中药的膜富集技术。具体地涉及由氧化石墨烯的纳米分散液作为中药膜富集方法中的吸附剂，用来富集丹参注射液中的酚酸类成分，属于天然药物提取制备领域。

背景技术

液体萃取法(包括液-液萃取法、液固萃取法)属于经典方法，但存在使用有毒有机溶剂，易对环境造成二次污染等缺点，尽管如此，仍然作为常用的前处理方法。为了克服上述方法的缺点，顶空法(液上空间法)、超临界流体萃取法、吹扫-捕集法、固相萃取法、固相微萃取法和膜技术等一系列微量富集技术被相继推出，为近年来迅速发展起来的新的有效的样品前处理方法。

丹参为唇形科植物丹参的干燥根和根茎，具有活血祛瘀、通经止痛、清心除烦、凉血消痈的作用，用于胸壁心痛、腕腹胁痛、月经不调、痛经经闭等症。现代药理学表明，丹参具有增加冠脉血流量、降低心肌兴奋性和传导性、降血脂、降低血液粘稠度、抑制血栓形成、抗血栓，以及改善微循环、改善肾功能、改善学习记忆等作用。而将丹参制成丹参注射液，使得用药过程更加方便快捷。在临床应用中，丹参注射液用于治疗脑血管意外诸如冠心病、心绞痛，以及治疗慢性肝病和辅治恶性肿瘤等。丹参注射液中所含的成分主要是水溶性酚酸类衍生物，包括原儿茶醛、咖啡酸、迷迭香酸、丹参素、丹酚酸B等。

基于上述背景，提供一种有效的样品富集方法将有助于分析工作更好的开展。随着气相色谱、气相色谱-质谱联用、气相色谱-傅立叶红外光谱联用、高效液相色谱等现代分析仪器的研究取得举世瞩目的进展，与之相应的痕量富集技术也应运而生。传统天然药物分析方法对于样品处理这一环节，以丹参注射液为例，基本是先对样品进行稀释、后直接进样分析，并未经过任何富集环节，使得仪器响应较低、灵敏度较差。

发明内容

本发明提供了一种以氧化石墨烯纳米分散液作为吸附剂的中药膜富集方法，用于富集丹参注射液中的酚酸类成分，具体包括：选取丹参注射液中所含有的三种代表性酚酸类成分，即原儿茶醛、咖啡酸、迷迭香酸，制备成标准品(或样品)溶液，水稀释后经纳米分散液吸附、富集、洗脱后，即得富集后的浓缩液并进样分析。

优选地，本发明所述的纳米分散液为氧化石墨烯-水纳米分散体系。

具体地，本发明所述的中药膜富集方法是通过下列技术措施来实现的：

a.称取标准品(或样品)，配制成标准品(或样品)溶液；

b.称取氧化石墨烯并制备成纳米分散液；

c.制备样品混合液，并采取最佳富集方案进行富集；

d.将混合液经过滤膜过滤，并按照最佳洗脱方案，用洗脱液对滤膜进行洗脱。

其特征是：

所述标准品，包括三种酚酸成分，分别是：原儿茶醛、咖啡酸、迷迭香酸。所述样品，为稀释10倍的丹参注射液水溶液。

所述纳米分散液，其特征在于物质配比为每25mL水中加入5mg氧化石墨烯。

所述的最佳富集方案，其特征在于富集的时间为2分钟。

所述的最佳富集方案，其特征在于富集所使用的仪器为回旋振荡器。

所述的最佳富集方案，其特征在于每11mL混合液中纳米分散液的加入体积为1.0mL。

所述的最佳洗脱方案，其特征在于洗脱液为微量甲醇。

所述的最佳洗脱方案，其特征在于洗脱液的体积为200μL。

具体的实验步骤为：

1.称取原儿茶醛、咖啡酸、迷迭香酸标准品统一放入1.5mL离心管中，加入50％甲醇水溶液配制成1000μg/mL的溶液。(或取丹参注射液100μL和900μL水加入到1.5mL规格的离心管中超声混合1min，制备成稀释10倍的丹参注射液水溶液)

2.称取5mg氧化石墨烯加入25mL水，称重，并置于超声仪中超声混合直至形成均匀的黑色分散体系，取出，静置，称重，并用水补足所减失的重量，即得氧化石墨烯纳米分散液。

3.取1只规格为50mL的锥形瓶。在锥形瓶中加入9mL纯水、1mL氧化石墨烯纳米分散液、15μL原儿茶醛、15μL咖啡酸、15μL迷迭香酸以及955μL纯水，称重。并将锥形瓶放入回旋振荡器中。

4.启动运行回旋振荡器，进行混合摇晃。2min后取出，静置，称重，用水补足所减失的重量，即得富集混合液。

5.取规格为5mL的注射器和0.45μm规格的微孔滤膜，分别用1mL无水甲醇和纯水对滤膜进行活化，吸取混合液，利用活化后的滤膜对混合液进行富集过滤。

6.取微量无水甲醇200μL于注射器中，对富集后的滤膜进行洗脱。取1只进样瓶，装入洗脱后的滤液。