[发明专利]Nα-苯甲酰-DL-精氨酸对硝基苯胺盐酸盐的合成方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种发色底物N^α-苯甲酰-DL-精氨酸对硝基苯胺盐酸盐的合成方法。

技术背景

N^α-苯甲酰-DL-精氨酸对硝基苯胺盐酸盐（BAPNA）是一种氨基酸衍生物，精氨酸的氨基被苯甲酰化后其羧基与对硝基苯胺上的氨基缩合成酰胺键，类似于一人工合成的二肽，上世纪六十年代发现该酰胺键可被某些蛋白酶（胰蛋白酶、木瓜蛋白酶等）所水解，而释放出的对硝基苯胺可用分光光度法加以测定，从而开启了一种利用人工合成底物来研究酶的活性的方法，因此该化合物又称之为发色底物。

现有技术中采用N,N-二环己基碳二亚胺（DCC）作为脱水缩合剂合成N^α-苯甲酰-DL-精氨酸对硝基苯胺盐酸盐，但由于对硝基苯胺的氨基碱性偏低，与经DCC活化的精氨酸上的羧基较难偶合，所以必须延长反应时间，约长达11个小时，且产率较低。

发明内容

针对现有技术的缺陷，本发明目的是提供一种反应时间短，高收得率的N^α-苯甲酰-DL-精氨酸对硝基苯胺盐酸盐的合成方法。

为解决上述问题，提供了如下的技术方案：

一种N^α-苯甲酰-DL-精氨酸对硝基苯胺盐酸盐的合成方法，包括如下步骤：

（1）以五氧化二磷为缩合剂，同时加入叔胺类的碱性溶剂，将对硝基苯胺与N^α-苯甲酰精氨酸进行缩合反应，获得N^α-苯甲酰-DL-精氨酸对硝基苯胺；

（2）加入盐酸，与所述N^α-苯甲酰-DL-精氨酸对硝基苯胺结合,获得N^α-苯甲酰-DL-精氨酸对硝基苯胺盐酸盐。

作为一个优选的方案，步骤（1）的反应溶剂为亚磷酸二乙酯。

作为另一个优选的方案，所述叔胺类的碱性溶剂为三乙胺或三丁胺。作为进一步的优选方案，所述三乙胺或三丁胺与所述对硝基苯胺的重量比为1:1。

作为另一个优选的方案，步骤（1）的反应温度为50～70℃；其中60℃为最佳。

与现有技术相比，采用本发明的技术方案，以五氧化二磷为缩合剂，采用叔氨类的碱性溶剂增加了反应环境的碱性，提高了对硝基苯胺的反应活性,能大大减少缩合反应的时间，同时提高收得率。

具体实施方式

为使本发明的技术手段、达成目的与功效易于明白了解，下面结合具体实施方式，进一步阐述本发明。

本发明的一个实施例为：

（1）配置甲溶液：五氧化二磷25克（0.176mol）、亚磷酸二乙酯75mL在烧杯中溶解成透明溶液；

（2）配置乙溶液：对硝基苯胺10克（0.0724mol）、三乙胺10mL、亚磷酸二乙酯75mL混合全溶；

（3）配置丙溶液：N^α-苯甲酰精氨酸20克（0.0718mol）,85%磷酸5mL,亚磷酸二乙酯75mL混合成悬浮液；

（4）将甲、乙两溶液混合均匀成透明状溶液，在搅拌下将丙溶液缓缓倒入，并在60℃水浴上加热搅拌2～3h，减压蒸出亚磷酸二乙酯，留下固体残渣；

（5）加入720mL1N HCl在85℃水浴上溶解5min，然后冷却至室温，放在0～4℃下11～12h，有固体析出；

（6）滤出固体，用冰水洗三次，抽干，选用五氧化二磷为干燥剂进行真空干燥，得产品23克（得率71.32%），该产品用315nm波长测定吸光值合格。

本发明的另一个实施例为：

（1）配制甲溶液：五氧化二磷37.5克（0.264mol）、亚磷酸二乙酯112.5mL在烧杯中溶解成透明溶液；

（2）配制乙溶液：对硝基苯胺15克（0.1086mol）、三乙胺15mL、亚磷酸二乙酯112.5mL混合全溶；

（3）配制丙溶液：N^α-苯甲酰精氨酸30克（0.1077mol）,85%磷酸7.5mL,亚磷酸二乙酯112.5mL混合成悬浮液；

（4）将甲乙两溶液混合均匀成透明状溶液，在搅拌下将丙溶液缓缓倒入，并在50℃水浴上加热搅拌2小时，减压蒸出亚磷酸二乙酯，留下固体残渣；

（5）加入1080mL1N HCl在85℃水浴上溶解5分钟，然后冷却至室温，放在0～4℃下11～12h，有固体析出；

（6）滤出固体，用冰水洗三次，抽干，选用五氧化二磷为干燥剂进行真空干燥，得产品35.6克（得率75.79%），该产品用315nm波长测定吸光值合格。