[发明专利]治疗慢性乙型肝炎的复制子DNA疫苗

权利要求书

1.治疗慢性乙型肝炎的复制子DNA疫苗，是携带复合乙肝抗原基因的重组复制子DNA疫苗质粒。

2.根据权利要求1所述的治疗慢性乙型肝炎的复制子DNA疫苗，其特征在于：所述复合乙肝抗原基因，命名为HBV-CS，其核苷酸序列如序列表中序列1所示，是自上游至下游顺次连接的HBV C区抗原基因（Genebank号GI:387538420）自5’端至3’端第1-225bp、通用CD4细胞表位PADRE、HBV大S区抗原PreS1（Genebank号GI:387538384）自5’端至3’端第61-141bp、HBV大S区抗原PreS2（Genebank号GI:387538384）自5’端至3’端第397-435bp、HBV C区抗原基因（Genebank号GI:387538420）自5’端至3’端第253-453bp、HBV大S区抗原S（Genebank号GI:387538384）自5’端至3’端第1-666bp。

3.根据权利要求1或2所述的治疗慢性乙型肝炎的复制子DNA疫苗，其特征在于：所述复合乙肝抗原基因HBV-CS的5’端还可连接佐剂基因，具体为FL（Genebank号GI:325197203）的胞外段基因，其核苷酸序列如序列表中序列2所示；将由FL的胞外段基因和复合乙肝抗原基因HBV-CS构成的融合基因命名为FL-CS，其核苷酸序列如序列表中序列3所示。

4.根据权利要求3所述的治疗慢性乙型肝炎的复制子DNA疫苗，其特征在于：所述融合基因FL-CS的3’端还可连接人IgGFc段基因（GenBank号：Z17370)。

5.根据权利要求4所述的治疗慢性乙型肝炎的复制子DNA疫苗，其特征在于：所述人IgGFc段基因的3’端还连接GPI基因(GenBank号：XM676434)，该融合基因命名为FL-CS-Fc,其核苷酸序列如序列表中序列4所示。

6.根据权利要求5所述的治疗慢性乙型肝炎的复制子DNA疫苗，其特征在于：所述FL-CS-Fc融合基因位于内部核糖体进入位点IRES的上游，在IRES的下游还连接了GM-CSF基因（Genebank号GI:NM-000758）和B7.1基因（Genebank号GI:NM-005191）等免疫分子基因，GM-CSF基因和B7.1基因之间通过一个能被弗林蛋白酶(furin)识别8肽编码序列连接，将该融合基因命名为FL-CS-Fc-IRES-GM/CSF-B7.1，其核苷酸序列如序列表中序列5所示。

7.根据权利要求1-6任一所述的治疗慢性乙型肝炎的复制子DNA疫苗，其特征在于：用于构建治疗慢性乙型肝炎的复制子DNA疫苗的出发载体优选为具有卡那霉素抗性的复制子DNA疫苗载体pSVK，pSVK是将pSCA1载体中的氨苄青霉素抗性基因置换为卡那霉素抗性基因得到的重组载体，其核苷酸序列如序列表中序列6所示。

8.根据权利要求7所述的治疗慢性乙型肝炎的复制子DNA疫苗，其特征在于：以pSVK为出发载体，构建的自上游至下游依次携带所述融合基因FL-CS、人IgGFc段基因、GPI基因以及GM-CSF基因和B7.1基因的重组复制子DNA疫苗质粒为pSVK-HBVA，其核苷酸序列如序列表中序列7所示。