[发明专利]一种阻断白介素12 p40功能的单克隆抗体及其编码基因和应用

说明书

技术领域：

本发明属于生物化学与分子生物学领域，具体涉及一种阻断白介素12p40功能的单克隆抗体及其编码基因和应用。 

背景技术：

白介素12(Interleukin12,IL-12)，又名细胞毒淋巴细胞成熟因子(cytotox-ic lymphocyte maturation factor,CLMF)，或者NK细胞刺激因子(natural killer cell stimulation factor,NK SF)，是白介素家族中的一员。它首先是由美国的Wistar从Epstein-Barr virus（EB病毒）转染人B淋巴母细胞系RPMI-8866的培养液中发现的，将其命名为NKSF，随后是由Hoffman研究小组从EB病毒转化的B细胞系NC37培养液中鉴定到，并命名CLMF，待完全纯化了两者并克隆基因后发现NKSF和CLMF是同一种细胞因子，并定名为IL-12。 

白介素12主要由树突状细胞，巨噬细胞，B淋巴细胞以及其他一些抗原提呈细胞(APC)产生，能够增强NK细胞(natural killer cell)和Tc细胞（cytotoxic T cell）的细胞毒作用；刺激静止或活化的T细胞和NK细胞产生干扰素γ（IFN-γ）；促进Th0向Th1的分化。促进Th1细胞分泌IFN-γ和IL-2，介导细胞免疫应答；诱导T细胞和NK细胞产生IFN-γ；增加髓外造血功能；IL-12在体内有抗血管形成作用，它不直接作用于血管内皮细胞，通过诱导IFN-γ的产生，从而抑制血管生成，此种抗血管生成的作用有助于抑制肿瘤的生长和转移。IL-12在机体早期的非特异性免疫和随后的抗原特异性的适应性免疫过程均扮演了极重要的角色，是一个多功能的免疫调节因子。 

一方面，IL-12参与机体的抗肿瘤、抗过敏、抗感染过程，另一方面，其过量产生又造成 机体免疫调节失衡而导致自身免疫病。过去认为自身免疫是由抗体及免疫复合物所介导的，而现在认为自身免疫特别是组织特异性自身免疫，是由T细胞介导或呈T细胞依赖性。研究表明，许多自身免疫病的免疫病理都与抗原特异性Th1细胞的产生有关，而IL-12是促使Th0向Th1分化的关键细胞因子，故IL-12在此类疾病的发生发展中起着极为重要的作用。 

IL-12诱导并促进细胞介导的自身免疫，这一事实被广泛地在非肥胖性糖尿病(NOD)小鼠动物模型、实验性结肠炎、胶原性关节炎(CIA)以及实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)和实验性自身免疫性葡萄膜炎(EAU)动物模型中得到证实。以上疾病的病理模型在IL-12缺陷小鼠或IL-12抗体中和的小鼠中均不能复制。且IL-12中和抗体可预防继承性接受髓磷脂碱性蛋白致敏淋巴细胞的小鼠发生EAE。 

IL-12在自身免疫诱导过程中的作用表现为：(1)促进抗原特异性Th1细胞分化增殖并产生多种细胞因子，增强Th1型免疫反应。已知Th1在诱发EAE、EAU、CIA等多种自身免疫病的过程中起关键作用，IL-12单克隆抗体或阻断剂均能减弱其Th1型反应，改善病情。(2)刺激单核巨噬细胞产生多种活性介质，增强免疫活性细胞的细胞毒作用，导致自身组织损伤。(3)IL-12亦参与抗体介导的自身免疫。许多研究报道IL-12参与狼疮性肾炎的发病机制，代表动物模型为MRL^Lpr/Lpr和NZB小鼠动物模型。在狼疮肾炎中IL-12的表达水平增高，增高的IL-12刺激NK细胞、T细胞产生IFN-γ，激活一氧化氮合酶(NOS)并产生NO，结果导致肾脏的病理损害。 

IL-12在自身免疫的诱导及免疫反应的维持方面起着极为重要的作用，因此阻断IL-12的产生或信号传导，任何一个环节均可预防或阻止自身免疫病的发生和发展。 

IL-12具有独特的异源二聚体结构，是由p40和p35两个亚基通过二硫键共价连接而成 的糖基化肽链〔相对分子质量为75000道尔顿〕。其重链(p40)由306个氨基酸组成，包含10个半胱氨酸残基和4个潜在的糖基化位点，轻链(p35)由197个氨基酸组成，包含7个半胱氨酸残基和3个潜在的糖基化位点。特异性结合p40亚基的单克隆抗体可作为IL-12通路的阻断剂，从而成为自身免疫疾病（例如斑块性银屑病）治疗的一种新药物。 

发明内容：

本发明的目的是提供一种阻断白介素12p40功能的单克隆抗体Ab123FR1及其编码基因和应用。