[发明专利]建立斑马鱼肠蠕动模型及筛选促胃肠动力药物的方法

权利要求书

1.一种斑马鱼肠蠕动模型的建立方法，其特征在于，包括下述步骤：

(1)斑马鱼选取

选取受精后5天的正常发育斑马鱼，放入微孔板中；

(2)荧光染料处理

移除微孔板中的养殖用水，设置若干实验组，每个实验组均加入10ng/mL的尼罗红溶液，于28℃恒温孵育16h；

(3)移除染料

移除微孔板中的荧光染料，清洗三次后，加入养殖用水，接着将微孔板于28℃恒温培养；

(4)荧光显微镜定量分析

移除微孔板中的液体，加入浓度为0.64mM的甲磺酸麻醉斑马鱼，用3％甲基纤维素胶侧位固定于双凹载玻片上后，接着置于荧光显微镜下对肠道部位进行拍照并保存，再利用图像处理软件进行图像分析，计算肠道荧光强度，促肠蠕动排空率的计算公式如下：

对计算结果进行统计学处理，根据统计学处理结果，判断已建立了斑马鱼肠蠕动模型。

2.一种如权利要求1所述的建立方法得到的斑马鱼肠蠕动模型的用途，其特征在于，所述模型用于评价或筛选促胃肠动力药物。

3.一种用如权利要求1所述的建立方法得到的斑马鱼肠蠕动模型评价或筛选促胃肠动力药物的方法，其特征在于，包括下述步骤：

(1)斑马鱼选取

选取受精后5天的正常发育斑马鱼，放入微孔板中；

(2)荧光染料处理

移除微孔板中的养殖用水，设置若干实验组，每个实验组均加入10ng/mL的尼罗红溶液，于28℃恒温孵育16h；

(3)化合物处理

移除微孔板中的荧光染料，然后按照待测化合物处理组、促肠蠕动药物阳性对照组、溶剂对照组、模型组，根据微孔板的规格分别加入相应的待测化合物溶液、促肠蠕动药物、溶剂、养殖用水，接着将微孔板于28℃下恒温培养6h；

(4)荧光显微镜定量分析

移除微孔板中的液体，加入浓度为0.64mM的甲磺酸麻醉斑马鱼，用3％甲基纤维素胶侧位固定于双凹载玻片上后，接着置于荧光显微镜下对肠道部位进行拍照并保存，再利用图像处理软件进行图像分析，计算肠道荧光强度，促肠蠕动排空率的计算公式如下：

对计算结果进行统计学处理，根据统计学处理结果，评价或筛选待测化合物的功效。

4.根据权利要求3所述的评价或筛选促胃肠动力药物的方法，其特征在于，所述的步骤(3)中促肠蠕动药物为30μg/mL的吗丁啉。