[发明专利]半乳糖凝集素3检测试剂盒及制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及半乳糖凝集素3含量检测试剂盒，尤其涉及一种人体内半乳糖凝集素3含量的检测试剂盒及其制备方法，本发明进一步涉及该检测试剂盒在检测人体内半乳糖凝集素3含量的使用方法，属于半乳糖凝集素3含量的检测领域。

背景技术

Galectins，即β-半乳糖血凝素超家族，是一类钙非依赖性的糖结合蛋白，具有高度保守性。目前，已发现该家族有14个成员，根据发现的先后顺序依次编号为1-14。Galectins家族的每个成员都具有以下特性：（1）具有特征性的氨基酸序列：每个Galectin家族成员至少包含一个由约130个氨基酸组成的糖识别结构域（CRD）；（2）具有对β-半乳糖苷的亲和性。

Galectin-3是Galectins家族唯一的嵌合体成员，由一个糖基与一个非糖基配体交联结合而成，分子量为32KD。在人类基因组中由单个基因编码，位于14号染色体q21-22位点，总长约17KD。Galectin-3包括3个结构域，NH2末端结合域，即1个糖结构识别域和1个特有的富含甘氨酸、脯氨酸和酪氨酸重复序列的结构域；NH2末端结合域包括控制细胞靶向的12个氨基酸残基，为与具有糖轭合物的细胞表面结合时发挥多种功能所必需；羧基末端的糖结合域可被胰蛋白酶裂解为包含140个氨基酸残基的糖结构识别域。

根据Galectins的分子结构特点，可以将其分为3组：（1）原型，即含有一个CRD的单体，以单体（Galectin-5，-7，-10）或二聚体（Galectin-1，-2，-11，-13，-14）的形式存在；（2）嵌合体型，由一个糖基与一个非糖基配体交联结合而成（Galectin-3）；（3）串联重复型，由两个CRD串联融合而成（Galectin-4，-6，-8，-9，-12）。

作为一种多功能的蛋白，Galectin-3广泛分布于心脏、肾脏、肝脏、肺脏以及肠道等组织器官以及成骨细胞、上皮细胞和肠组织等各种组织和细胞中，并在激活的巨噬细胞、嗜碱性粒细胞、肥大细胞等血液细胞中高表达。根据细胞类型，Galectin-3可存在于细胞浆、细胞核、细胞膜或细胞外基质，其在细胞内的分布依赖于细胞的增值状态。在静止期细胞，Galectin-3主要分布在胞浆；在增殖期细胞，Galectin-3主要分布在细胞核。Galectin-3可通过非经典分泌途径分泌到细胞外，与细胞表面受体和糖蛋白相互作用，参与跨膜信号转导。Galectin-3可参与细胞生长、细胞黏附、细胞凋亡、炎性反应、免疫调节、新血管形成、肿瘤分化转移等各种生理和病理过程。研究表明，Galectin-3作为一种重要的促有丝分裂原能在旁分泌方式下通过凝集素-碳水化合物相互作用来刺激肌成纤维细胞的增值和胶原合成。

多项研究显示，随着心力衰竭程度的加重，血浆Galectin-3的表达水平呈逐步升高趋势，与健康对照组比较，差异具有统计学意义。心力衰竭组心功能Ⅲ级、Ⅳ级患者血浆Galectin-3水平较健康对照组升高，提示Galectin-3水平的升高可能提示心力衰竭失代偿，可能成为评价心功能分级的新的生物学标志物和治疗新靶点。

目前，Galectin-3常用的检测方法为酶联免疫法(ELISA)，酶联免疫法检测的准确度较高，但是检测过程繁琐，耗时较长且样本需要批量检测，不适用于及时检测。胶乳增强透射免疫比浊检测（PETIA）技术是在胶乳凝集定性试验基础上发展建立的一种非放射性均相免疫测定法，可以对各种微量的抗原物质和小分子半抗原进行精确的定量测定，目前越来越多的应用到临床实验室中。与ELISA技术相比，PETIA有效的提高检测速度和降低检测成本。然而，半乳糖凝集素3的定量检测分析需要较高的灵敏度，因此需要对PETIA技术参数进行优化以达到检测要求。

发明内容

本发明的目的之一是提供一种稳定性好、灵敏度高、特异性强、操作简单、线性范围宽的半乳糖凝集素3含量检测试剂盒。

本发明的目的之二是提供一种所述半乳糖凝集素3含量检测试剂盒的制备方法。

本发明的上述目的是通过以下技术方案来实现的：

一种半乳糖凝集素3含量检测试剂盒，由彼此独立的试剂Ⅰ和试剂Ⅱ组成，所述试剂Ⅰ的组分包括：生物缓冲剂、促凝剂、防腐剂、螯合剂、无机盐和水；所述试剂Ⅱ的组分包括：包被半乳糖凝集素3抗体的胶乳颗粒、生物缓冲剂、表面活性剂、防腐剂、助悬剂、封闭剂和水。