[发明专利]猪口蹄疫O型合成肽疫苗及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及疫苗，尤其涉及一种猪口蹄疫O型合成肽疫苗及其制备方法。

背景技术

口蹄疫是由口蹄疫病毒所引起的一种急性、热性、高度接触性传染的动物传染病。口蹄疫主要侵害偶蹄类动物，其临床诊断特征为口腔粘膜、蹄部和乳房皮肤发生水疱。成年动物感染口蹄疫后一般致死率不高，但其发病率可达100％，发病动物的口、蹄部会出现大量水疱，精神沉郁，进而使得畜产量锐减。幼畜感染口蹄疫后则经常会不见症状地猝死，严重时致死率可达100％。由于口蹄疫传播迅速、难于防治、补救措施少，因此每次爆发后只能屠宰和集体焚毁染病牲畜以绝后患，从而给畜牧产业造成巨大的经济损失。

口蹄疫病毒是口蹄疫的致病原，其属于细小核糖核酸病毒，具有多血清型、高变异性等特点。已知口蹄疫病毒目前有O、A、C、SAT1(南非I型)、SAT2(南非II型)、SAT3(南非III型)和Asia1(亚洲I型)7个主要血清型。每种主型又分若干亚型，目前发现的亚型已有70多种。口蹄疫病毒各型之间的抗原性常常不同，彼此之间不能交互免疫，而且在同一种血清型中抗原变异的程度也很大，以至于能够有效地抵抗一种亚型的口蹄疫疫苗可能对同一血清型中的另一种亚型却没有保护。

因为口蹄疫病毒的高异变性和各血清型之间通常不能相互免疫，所以给口蹄疫的防治工作带来巨大的困难。目前仍迫切需要提供对口蹄疫病毒具有良好免疫原性的疫苗，理想的疫苗还应对多种不同亚型的口蹄疫病毒都具有良好的免疫原性，从而可以为牲畜提供广泛的免疫保护。

VP1是口蹄疫病毒的四种结构蛋白之一。对病毒结构蛋白大量研究表明，VP1蛋白是引起免疫反应的最主要抗原(Laporte et al.，1973；Bachrach et al.，1975)。然而，科学家们使用纯化的病毒VP1蛋白或重组VP1蛋白免疫动物，结果引起的免疫反应性都很低。这或许是由于其丧失了原有的抗原结构所致(Klied etal.，1981；Brown，1992)。1982年，Bittle等人对数种不同抗原位点图谱进行了分析，最后发现，VP1上激发保护性免疫反应的氨基酸区域为141～160。Acharya等(1989)，通过对VP1的X光晶体衍射图谱(X-ray crystallo-grapH)研究分析发现，该区域暴露在病毒表面呈环状，而且是主要免疫性抗原。Dimarch用合成O1K病毒VP1的141-158和200-213片段氨基酸组成的40个氨基酸肽(C-C-200-213-P-P-S-141-158-P-C-G)，在其中间加上两个脯氨酸和一个丝氨酸，使多肽折成立体构型，达到提高了单段肽(141-158-P-C-G)在豚鼠中的应答水平，并提出了N-末端氨基酸(C-C)在提高保护应答的重要性。Brown等用化学法合成了FMDV VP1基因编码的140-160及200-213位肽段基因片段，并在大肠杆菌体内得到了表达，用其免疫牛、猪等都获得了较好的免疫力。肽的此环状结构具有同辅助性T细胞(T-helper cell，Th)结合位点(T-helper cell epitope，Th site)相结合的能力。T细胞结合位点通常是由与大分子蛋白结合而形成(Bittle et al.，1982；Brown et al.，1999)，或由与具有此种构造的各类型混合性肽相结合而构成(DiMarchi et al.，1986；Francis etal.，1990；Collen et al.，1991；Taboga et al.，1997)。Francis等(1990)发现口蹄疫病毒的VP1区域中存在该结构。单纯的口蹄疫病毒VP1多肽与大分子蛋白质的结合体，可激发小动物产生高滴度的中和抗体，具有良好的保护效果，但对大中型动物只有有限的保护效力(Rodrigues et al.，1994；Zamorano et al.，1995；DiMarchi et al.，1986；Nargi et al.，1999)。

因此，制造有效的口蹄疫合成肽疫苗的重要基础是在VP1的环状结构上选出一段氨基酸序列，并使得该序列具有使动物B细胞产生高滴度中和抗体的抗原位点。

发明内容

本发明的目的之一是提供一种安全高效的猪口蹄疫O型合成肽疫苗。

本发明的目的之二是提供上述合成肽疫苗的制备方法。

本发明的上述目的是通过以下技术手段实现的：

一种猪口蹄疫O型合成肽疫苗，含有如SEQ ID No.1和SEQ ID No.2所示的氨基酸序列的合成肽抗原。