[发明专利]鹰嘴豆壳二孢叶枯病真菌分子检测试剂盒及检测方法

权利要求书

1.一种鹰嘴豆壳二孢叶枯病病原菌的检测试剂盒，其特征在于该试剂盒为：A液PCR反应液和B液阳性对照组成；其中

A液为PCR反应液，由含染料的2×Taq PCR MasterMix，上游引物7-5f20μM，下游引物7-5r20μM，超纯水重量浓度≥99％组成；

B液为阳性对照：鹰嘴豆壳二孢叶枯病病原菌标准株DNA，DNA浓度为100ng/μL。

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于A液中的上游引物为7-5f25bp：5′-CCCGCTACCTCTTACCCATGTCTTT-3′，下游引物为7-5r23bp：5′-GTCGTTATGAGTGCAAAGCGCGA-3′。

3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于A液中含染料的2×Taq PCR MasterMix中包含Taq DNA聚合酶0.05units/μL，氯化镁4mM，脱氧核酸三磷酸基质0.4mM，其中脱氧核酸三磷酸基质由dATP，dCTP，dGTP，dTTP四种脱氧核糖核酸组成，购自北京庄盟生物基因科技有限公司，货号为ZT201-02，LOT#1BH09N。

4.根据权利要求1所述的鹰嘴豆壳二孢叶枯病病原菌的检测试剂盒的检测方法，其特征在于按下列步骤进行：

a、待检样品或真菌的DNA提取，采用常规真菌DNA提取方法；

b、取步骤a所得DNA模板1μL，A液24μL，进行PCR反应，PCR反应条件：温度94℃预变性5min，温度94℃，变性50s，温度57.5℃，退火50s，72延伸2min，共30各循环，最后温度72℃，10min，温度4℃保存；

c、将扩增产物于1％琼脂糖凝胶电泳检测。