[发明专利]一种家畜精液冷冻保护剂及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及家畜人工授精的改良技术领域，具体涉及一种能够提高家畜冷冻精液品质的冷冻保护剂及其制备方法。

背景技术

精液冷冻保存是指将精液经过特殊处理后置于液氮（-196℃）或干冰（-79℃）中，使得精子的代谢活动状态暂时停止，从而可达到长时间保存该物种种质资源，切实发挥良种公畜的遗传资源的目的。该技术可以大大提高优良公畜的利用率，减少饲养量，节约成本，可直接帮助农牧民增产增收。同时还可以缓解目前国内人畜争粮问题，减少温室气体排放，降低由于退耕还草引起的种植业生产压力。该技术使得优良基因不受时间、地域的限制，是一种能把优秀的遗传资源广泛传播的有效手段。

虽然家畜精液冷冻技术在家畜育种以及种质资源保存等方面都有重要意义，但是家畜的精液冷冻保存技术目前很难推广应用，主要是由于家畜精子本身对温度变化特别敏感，在冷冻过程中极易损伤，从而使家畜冷冻精液生产难度系数加大，解冻后精子复苏率低，导致母畜的受胎率低、窝产仔数少。该技术难题严重制约着家畜品种的改良和育种进程。

发明内容

本发明的目的是针对现有问题与不足，提供一种能有效延长家畜精子超低温冷冻保存存活效率以及有利于维持精子顶体完整性的家畜精液冷冻保护剂。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种家畜精液冷冻保护剂，包括A液和B液，所述A液每升包含以下物质：40-60g葡萄糖，1-2g乙二胺四乙酸，3-6g二水柠檬酸钠，0.5-3g碳酸氢钠，0.1-0.5g氯化钾，8×10⁵-1.2×10⁶IU青霉素，8×10⁵-1.2×10⁶IU链霉素；所述B液每升包含以下物质：17.5-28g果糖，14-24g三羟甲基氨基甲烷，7-16g柠檬酸，8×10⁵-1.2×10⁶IU青霉素，8×10⁵-1.2×10⁶IU链霉素，1-5%甘油，1-5%DMF，1-5%乙二醇，18-25%蛋黄。

优选地，所述A液每升包含以下物质：50g葡萄糖，1.5g乙二胺四乙酸，4g二水柠檬酸钠，1g碳酸氢钠，0.1g氯化钾，1×10⁶IU青霉素，1×10⁶IU链霉素；所述B液每升包含以下物质：21.9g果糖，18.25g三羟甲基氨基甲烷，10.95g柠檬酸，1×10⁶IU青霉素，1×10⁶IU链霉素，2%甘油，2%DMF，2%乙二醇，20%蛋黄。

本发明的另一个目的是提供一种精液冷冻保护剂在提家畜生产性能上的应用。其包括步骤：

步骤一制备A液：

将40-60g葡萄糖，1-2g乙二胺四乙酸，3-6g二水柠檬酸钠，0.5-3g碳酸氢钠，0.1-0.5g氯化钾，8×10⁵-1.2×10⁶IU青霉素，8×10⁵-1.2×10⁶IU链霉素，加蒸馏水稀释到1L，混匀后消毒。

步骤二制备B液：

将17.5-28g果糖，14-24g三羟甲基氨基甲烷，7-16g柠檬酸，8×10⁵-1.2×10⁶IU青霉素，8×10⁵-1.2×10⁶IU链霉素，1-5%甘油，1-5%DMF，1-5%乙二醇，18-25%蛋黄，加蒸馏水稀释到1L，混匀后消毒。

步骤三冻存精液：

1）收集精子活率在75％以上的精液，离心去上清后加入37℃预热的与精子等体积的A液，放入装有37℃水的烧杯中，置于17℃恒温箱中平衡2h；

2）取出再离心去上清后加入17℃预热的B液，放入装有17℃水的烧杯中，置于4℃冰箱中平衡2h；

3）将平衡好的B精液混合液装入0.25ml冷冻细管中，放入程序降温仪中，从4℃开始，1℃/min，降到-6℃，取出，置于液氮上熏蒸15min，装袋置于液氮罐中冻存。

优选为，步骤一制备A液：

将50g葡萄糖，1.5g乙二胺四乙酸，4g二水柠檬酸钠，1g碳酸氢钠，0.1g氯化钾，1×10⁶IU青霉素，1×10⁶IU链霉素，加蒸馏水稀释到1L，混匀后消毒。

步骤二制备B液：