[发明专利]一种那非类药物的检测方法及检测试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及一种那非类药物的检测方法及检测试剂盒。

背景技术

磷酸二酯酶是NO-cGMP通路的负调节因子，它通过催化cGMP的分解而调低一氧化氮的作用，一般认为体内的一氧化氮是一个调节血管平滑肌扩张的因子，因而磷酸二酯酶作用的结果是促进血管平滑肌的收缩。那非类药物可以高选择性的抑制人体内5型磷酸二酯酶（PDE5）活性，PDE5在阴茎海绵体内表达水平极高，而在人体其他组织和器官中则表达较低。服用那非类药物后，阴茎海绵体血管平滑肌在药物的作用下舒张，血液流量增加，海绵体充血，阴茎勃起，从而产生对阴茎勃起功能障碍的治疗作用。

那非类药物主要的不良反应来自于它对人体其他部位磷酸二酯酶的抑制作用。常见的不良反应有：头晕、鼻塞、消化不良以及一过性的视觉异常，这种异常可能表现为蓝/绿颜色辨别异常、光感增强或视物模糊。以上这些不良反应大多是由于相关的平滑肌松弛造成的。另外那非类药物比较严重的不良反应还包括：卧位血压下降和心输出量下降，此外临床研究显示服用那非类药物后进行性行为，发生心脏异常的几率增加，这包括心绞痛、头晕、恶心等症状，并有可能造成心源性猝死。

近年来，在补肾壮阳类中药制剂和保健品中非法添加那非类药物的情况甚为严重。查处在补肾壮阳类药品和保健品中擅自添加那非类药物的违法行为，是一项长期的任务。它涉及范围广，需要进行大量的检验，在广大的农村地区和经济欠发达的中小城市开展这项检验活动有较大难度。

现有的检验药品和保健品中掺杂那非类药物的方法有：

1、薄层色谱法

样品中的待测成分用混合溶剂[乙醇-正己烷-氨水（70:30:1）]提取，所得的供试品溶液和对照品溶液点在同一块薄层色谱板上，用展开剂展开，晾干后，在紫外灯下检示。若那非类药物对照品斑点相应位置未见色谱斑点（低于检测灵敏度），可认为产品中为掺有那非类药物，若有明显斑点，应怀疑可能掺有那非类药物。

薄层色谱法的优点是不需要使用昂贵的分析仪器。该方法的缺点是：（1）色谱分辨率较低，保健品成分复杂，干扰因素多，易将某些共存成分误判为那非类药物，某些共存成分如果量较大且色谱迁移值与那非类药物接近则会干扰目标成分的检出。（2）色谱展开和晾干的时间长，不能满足快速测定的要求。（3）要求实验人员有较好的经验。（4）需要有固定的实验场所，不适合作流动性大的现场检测。

2、高效液相色谱法

高效液相色谱法是常用的现代分析方法。在相同的色谱条件下，不同的物质有不同的色谱保留时间。在相同是色谱条件下那非类溶液对照样品溶液和样品提取所得的供试品溶液分别进样，根据色谱保留时间可检测那非类药物的含量。

高效液相色谱法的优点是色谱分离效率高，灵敏度高。其缺点是：（1）仪器价格昂贵，样品前处理时间长，大多数针对单一产品，使用的流动相多为一定比例的甲醇和盐溶液，试验后需要用大量水冲洗色谱柱，色谱柱易受污染，分析成本高；（2）当共存成分的色谱保留时间与西地那非的色谱保留时间接近时容易作出错误的判断；（3）仪器对使用环境要求高，需要固定摆放，不适合作流动性大的现场检测。

3、高效液相色谱-质谱联用法

采用液质联用技术，可以对高效液相色谱分离出的那非类药物峰进一步作质谱分析鉴定。适用于成分复杂、背景干扰严重的样品分析，这种分析方法可提高检验结果的可靠性。

缺点：分析成本高，操作复杂；仪器对使用环境要求更高，需要固定摆放，不适合作流动性大的现场检测，不易推广使用。

发明内容

本发明的目的在于提供一种克服现有技术存在的缺点，分析成本低、不需要使用贵重分析仪器、专属性强、灵敏度高，适用于现场检验药品、保健品是否掺入那非类药物的快速检测方法。

本发明的那非类药物的快速检测方法，依次包括如下步骤：

（1）取样品加入酸性溶液提取； 

（2）加入萃取剂萃取，萃取液中加入缓冲液；

（3）加入溴甲酚绿溶液，观察溶液是否显示黄色。

那非类药物有三个可接受质子的氮原子，在酸性溶液中，接受三个质子后生成带三个正电荷、呈游离态的阳离子（以R³⁺表示）。酸性溶液的存在可增强那非类药物生成游离态阳离子（R³⁺）的能力，使溶液中游离态阳离子（R³⁺）有较高的浓度。

酸性溶液为稀盐酸、稀硫酸或稀磷酸中的一种，浓度为0.01~0.1mol/L，或前述几种酸性溶液的混合溶液，优选为0.05mol/L稀盐酸。