[发明专利]一种地衣芽孢杆菌的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及发酵工程领域，具体涉及一种地衣芽孢杆菌的制备方法。

背景技术

地衣芽孢杆菌（Bacillus licheniformis）具有促进肠道内正常生理性厌氧菌的生长，调整肠道菌群失调，恢复肠道功能的作用，同时对肠道细菌感染具有特效。

现有地衣芽孢杆菌的制备方法产物单一，目前的工艺仍有待改进。

发明内容

本发明的目的在于提供一种既能制备优良地衣芽孢杆菌，又能制备大量其他有益代谢产物的制备方法。

为实现上述目的，本发明的技术解决方案是：提供一种地衣芽孢杆菌的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

液态发酵： 8%接种地衣芽孢杆菌于发酵罐中，边加边搅拌，添加结束后，控制一定的搅拌转速，好氧培养，保持一定温度，发酵过程pH值不低于6.5；

所述液体培养基成分为：淀粉0.5重量%，尿素0.5重量%，豆粕粉1重量%，磷酸氢二钾0.6重量%，磷酸二氢钾0.3重量%，酵母膏0.05重量%，硫酸镁0.1重量%，硫酸锰0.02重量%； 

固体发酵：50%接种液态发酵所得到的发酵液于固体培养基中，进行封闭式厌氧发酵一定时间，保持一定温度，发酵过程pH值不低于6-6.5；

所述固体培养基成分为：红糖1重量%，玉米粉50重量%，麸皮37.35重量%，豆粕粉10重量%，硫酸镁0.6重量%，硫酸铵0.5重量%，磷酸氢二钾0.5重量%，吐温-80 0.05体积%；

烘干和检测。

所述地衣芽孢杆菌为保藏号为CGMCC No. 2876的地衣芽孢杆。

所述液态发酵为8%接种保藏号为CGMCC No. 2876的地衣芽孢杆菌于所述发酵罐中，边加边搅拌，搅拌速度60-80rpm，添加结束后，控制转速230-270rpm的条件下好氧培养48小时，保持温度37℃，发酵过程的初始通气量为1:0.5，pH值不低于6-6.5；发酵过程中灌压为0.04—0.06Mpa；

所述固体发酵为50%接种液态发酵所得到的发酵液于固体培养基中，进行封闭式厌氧发酵80-110小时，72小时之前35—38℃，72-96小时升温至55-60℃。

所述烘干采用气流干燥方式烘干，所述烘干温度不高于85℃，优选为80—85℃。

所述检测为NY1461-2007 方法检测活菌总数；显微镜计数法检测芽孢数；液相色谱仪检测有机酸；碘-淀粉比色法检测淀粉酶；福林-酚试剂法检测蛋白酶。本发明还保护所述方法制备的地衣芽孢杆菌和或其他成分，所述其他成分为有机酸和或消化酶；优选的，所述有机酸为3-甲基丁酸，2-甲基-丁酸，苯乙酸，十五烷酸，软脂酸，亚油中的至少一种；所述消化酶为淀粉酶和蛋白酶中的至少一种。

本发明与现有方法相比，增加了固体、厌氧式发酵阶段，在这个阶段中，地衣芽孢杆菌数量不再增加，但产生大量代谢产物，使得最终产品既含有益生菌-地衣芽孢杆菌，又含有益生元-代谢产物，这两类物质的综合作用，能显著改善动物的胃肠道功能，促进动物健康生长，效果优于单一的活菌。同时本发明的方法简单，成本低廉。便于工业化实施。

具体实施方式

下面详细描述本发明的实施例，所述实施例的示例旨在用于解释本发明，而不能理解为对本发明的限制。实施例中未注明具体技术或条件者，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。

实施例1： 液态发酵

1、培养基组份：淀粉0.5重量 %，尿素0.5重量%，豆粕粉1重量%，磷酸氢二钾0.6重量%，磷酸二氢钾0.3重量%，酵母膏0.05重量%，硫酸镁0.1重量%，硫酸锰0.02重量%。

2、接种量：8%地衣芽孢杆菌（Bacillus licheniformis），来自厦门大学化学化工学院，保藏于CGMCC，保藏号CGMCC No.2876，保藏日期2009年01月14日，专利号：ZL201010269454，公开日期是 2010年12月01日。

3、温度：37℃

4、初始通气量：1:0.5

5、发酵过程pH值：不低于6.5

6、搅拌转速：250rpm

7、发酵过程溶氧量相对值：不低于25%

8、发酵过程中灌压：0.04—0.06Mpa