[发明专利]重组人白介素4基因、含重组人白介素4基因的工程菌发酵方法无效
| 申请号： | 201310188061.0 | 申请日： | 2013-05-20 |
| 公开（公告）号： | CN103320447A | 公开（公告）日： | 2013-09-25 |
| 发明（设计）人： | 徐东;张锦伟 | 申请（专利权）人： | 深圳市亚太兴实业有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/24 | 分类号： | C12N15/24;C12N1/21;C12P21/02;C12R1/19 |
| 代理公司： | 深圳中一专利商标事务所 44237 | 代理人： | 张全文 |
| 地址： | 518103 广东省深圳*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 重组 白介素 基因 工程 发酵 方法 | ||
1.一种重组人白介素4基因，其特征在于：所述重组人白介素4基因的基因序列如SEQ ID NO：1所示，所述重组人白介素4基因编码的氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示。
2.一种含重组人白介素4的工程菌发酵培养方法，包括如下步骤：
构建含重组人白介素4的大肠杆菌工程菌；
将所述含重组人白介素4的大肠杆菌工程菌进行种子培养；
取种子培养后的重组人白介素4的大肠杆菌工程菌进行发酵培养，所述发酵培养的条件为：溶氧为30%-40%，pH为7.2±0.1，温度为37℃，通气量为7.5L/min，搅拌转速400rpm-800rpm，培养5h后，培养温度以0.5℃/h梯度30℃恒温培养12h。
3.如权利要求2所述的含重组人白介素4的工程菌发酵方法，其特征在于，所述发酵培养至工程菌OD600为2-3后用乳糖诱导，使乳糖浓度保持在3-5g/L。
4.如权利要求3所述的含重组人白介素4的工程菌发酵方法，其特征在于，所述构建含重组人白介素4的大肠杆菌工程菌步骤如下：
提取人肝素抗凝血中的mRNA，反转录成cDNA；
以所述cDNA为模板扩增人白介素4基因，连入载体pUC19，得pUC-IL4；
双酶切所述pUC-IL4及pET31-b（+），回收人白介素-4片段，及双酶切质粒pET31-b（+），链接，得到pET31-IL-4；
将质粒pET31-IL-4转化进入大肠杆菌BL21(DE3)，得到工程菌。
5.如权利要求4所述的含重组人白介素4的工程菌发酵方法，其特征在于，所述扩增步骤中使用的上游引物序列如SEQ ID NO：3所示，下游引物序列如SEQ ID NO：4所示。
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