[发明专利]与胎儿先天性心脏病相关的母体血清/血浆miRNA标志物mir-19b及其应用

说明书

发明领域

本发明属于医学领域和基因工程，涉及与胎儿先天性心脏病相关的母体血清/血浆miRNA标志物mir-19b及其应用。

背景技术

先天性心脏病（congenital heart disease，CHD）是指心脏和胸内大血管的结构畸形及其可能导致的功能性异常，它是胎儿及新生儿缺陷中最常见的一种。每年约有5‰-8‰的新生儿患有CHD，这一发生率是染色体异常的6倍，神经管缺陷的4倍。CHD患儿中大约有50%病情严重，在出生后需要接受数次的外科治疗，而且很多时候即使在有外科干预的条件下，死于CHD的新生儿仍占新生儿总死亡率的40%，其中20%死于出生后第一个月。因此，早期诊断、早起干预、及时合理治疗是减少CHD发病率和死亡率的关键，是亟待解决的重大科学问题。

目前早期诊断CHD的方式主要是胎儿超声心动图。据统计，该方法诊断CHD的灵敏性和特异性分别可以达到85%（95%CI，78-90%），99%（95%CI,98-100%）。尽管这一数据表明心超诊断CHD的水平很高，但该方法仍受到多方面的的限制。被检查者的肥胖程度、超声设备的分辨率、检查者的技术及经验等都可能会影响到检查的最终结果。因此，我们亟需发现更加明确而有效的生物标记物，对CHD做出辅助早期诊断，这将有助于早期干预，早起治疗，减少CHD的发生率，提高患儿的生存率。

miRNA是近年来分子生物学研究领域的一个热点，它是一类生物体内自然生成的小分子非编码RNA，其成熟状态长约19-23个核苷酸，具有高度保守性。miRNA通过参与调节其特异靶基因的表达，来控制蛋白的产生，调节发育时序，从而参与细胞的增殖，分化，代谢与凋亡，在机体生长发育及疾病发生过程中发挥重要作用。自从发现lin-4与let-7参与调控线虫时序发育以来，越来越多的miRNAs被人们发现，miRNAs与疾病的关系也已经成为研究的热点与重点。近年来，已经发现miRNAs通过负反馈基因的表达与乳腺癌，肺癌，胃癌，糖尿病，心脏病等的发病密切相关。

生物标记物是指能将机体的生理和病理状态区分开来的生物分子。筛选到可用于CHD早期发现、早期诊断的生物标志物可大大提高CHD患儿的临床治疗效果。最新数据显示心脏组织有其特异性的miRNAs，即这些miRNAs的表达水平与相同组织的正常细胞存在显著差异，而特征性的miRNAs异常表达可望成为用于CHD早期诊断的生物标志物，显示了美好的临床应用前景。

近年来研究证实，miRNAs能稳定存在于血清/血浆中，且含量丰富、易于定量检测，具有显著的疾病特异性。这些特点都使得运用定性和定量miRNA分子技术，将血清miRNA作为生物标志物比传统的标记方法将更加有效，为生物标记技术及疾病诊断开拓了新境界。

目前有关血清/血浆miRNA的来源还没有定论，有些研究者认为肿瘤患者血清/血浆中的miRNA来源于靶组织，但其表达变化与靶组织的一致性还有待探讨；也有研究者认为miRNA可以被选择性富集到“microparticles(MPs)”或“exosomes”中，由细胞以“microvesicles微泡”脱落的方式主动向外分泌。具有共识的意见是，组织/细胞来源的miRNA表达谱与血清/血浆来源的miRNA表达谱是两个不同的体系，二者的表达谱并不完全一致，也没有文献报导二者存在关联性。不同来源的miRNA表达谱中特定miRNA的表达不一定在相同时段发挥相同的调控作用，组织/细胞中表达的miRNA不一定在血清/血浆中具有同样的表达量。鉴于目前还没有用于CHD辅助早期诊断的较为稳定的生物标志物的现状，将母血清/血浆miRNA作为筛选CHD的生物标志物，并研制相应的辅助早期诊断试剂盒，具有广泛的科研价值和临床应用的前景。

发明内容

本发明的目的是针对上述技术问题，提出一种与CHD相关的母血清/血浆miRNA标志物。

本发明另一个目的是提供上述miRNA标志物的引物或探针。

本发明还有一个目的是提供上述miRNA标志物及其引物或探针在制备CHD辅助早期诊断中的应用。

本发明再一个目的是提供CHD辅助早期诊断试剂盒。