[发明专利]一种多足蕨甙A的提取分离方法

说明书

技术领域

本发明属于天然产物分离领域，尤其涉及一种多足蕨甙A的提取分离方法。

背景技术

多足蕨甙A（Polypodoside A）属甾体皂苷类，分子式为C₄₅H₇₂O₁₇，分子量885.05。多足蕨甙A可以作为甜味剂，其甜度为6%(w/v)蔗糖溶液的600倍。多足蕨甙A主要来源于水龙骨科(Polypodiaceae) 甜根多足蕨Polypodium glycyrrhiza DC.Eaton 的根茎。目前，大规模开发无毒、使用安全、低热量、天威素质优良又具有保健作用的天然甜味剂代替蔗糖和人工合成甜味剂，是国内外科技工作者迫切需要解决的大课题。

目前，国内尚未见采用高速逆流色谱法提取纯化多足蕨甙A的相关文献和专利的报道。

高速逆流色谱法（High-speed Countercurrent Chromatography，简称HSCCC），是一种新型的、连续高效的液液分配色谱技术，与其它色谱技术不同的是它不需任何固态载体，因此能避免固相载体表面与样品发生反应而导致样品的污染、失活、变性和不可逆吸附等不良影响。同时它也具有适用范围广、快速、进样量大、费用低、回收率高等优点。因此，在生物、医药、食品、材料、化妆品和环保等领域获得了广泛的应用，尤其是在天然产物活性成分的分离纯化领域。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种多足蕨甙A的提取分离方法，该方法操作简单，产品含量高。

本发明是采用以下技术方案来实现的：

（1）取甜根多足蕨的根茎原料粉碎，加生物酶酶解1-3天，得酶解原料；

（2）酶解原料加5-10倍量70-95%的乙醇溶液混合后，进行负压空化混悬固液萃取，得到提取液；

（3）提取液浓缩至浸膏，加适量水分散后，加入1-3倍量的水饱和正丁醇萃取2-4次，合并萃取液加0.6-1.1倍量丙酮沉淀，过滤，滤液浓缩干燥得到粗品；

（4）以石油醚-乙酸乙酯-乙醇-水（5-8:2-3:3-5:2-4）作为两相溶剂系统，混匀后置分液漏斗中静置分层，取上相为固定相，下相为流动相，将粗品粉末用下相溶解，注入高速逆流色谱仪，收集高含量多足蕨甙A流分，浓缩干燥即得多足蕨甙A产品。

所述步骤（1）中生物酶可选果胶酶、纤维素酶和淀粉酶中的任一种，用量为原料重量的多足蕨甙A 0.8-1%。

所述步骤（4）中高速逆流色谱仪转速750-950r/min，流动相流速2.8-3.5ml/min。

本发明的积极效果是：

1）采用生物酶解分解物质组织结构，提高了提取率，缩短了提取时间，而且采用负压空化混悬固液萃取的方法对植物原料中的多足蕨甙A进行提取，时间短，效率高；

2）高速逆流色谱法分离：无需使用载体，减少了操作过程中样品的损失，分离效果好，制备量大。

下面将结合具体实施方式进一步说明本发明，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施例。

具体实施方式：

实施例1：

甜根多足蕨的根茎原料粉碎，过40目筛，称取3kg，加30g的果胶酶混合均匀，酶解3天，酶解原料加24L70%的乙醇溶液空化混悬50min，进行负压空化混悬固液萃取1次，得到萃取液，浓缩至浸膏，加800ml水分散，再加800ml水饱和正丁醇萃取2次，合并萃取液，加1600ml丙酮沉淀，过滤，滤液浓缩干燥得到粗品；以石油醚-乙酸乙酯-乙醇-水（5:2:3:3）作为两相溶剂系统，混匀后置分液漏斗中静置分层，取上相为固定相，下相为流动相，将粗品粉末用下相溶解，再用上相泵满色谱柱，然后以2.8ml/min的流速泵入流动相，平衡后设定色谱仪转速为850r/min，通过进样阀进样，每次进样量为150mg，收集高含量多足蕨甙A流分，浓缩干燥即得多足蕨甙A产品6.7g，含量98.3%。

实施例2：