[发明专利]一种快速诊断上颌窦癌的CRISP1试纸

说明书

技术领域

本发明涉及一种CRISP1试纸，具体地说，是关于一种快速诊断上颌窦癌的CRISP1试纸。

背景技术

上颌窦位于上颌骨内，呈锥形，锥尖向颧突，与口腔、鼻腔、眶底、颅底相毗邻。上颌窦内黏膜为柱状上皮，并含有小黏液腺。上颌窦癌分原发性与继发性两类。原发性系指癌瘤源自窦内黏膜；继发性主要是指原发于上牙龈、腭部或鼻腔、筛窦的癌瘤侵入上颌窦所致。本发明主要讨论原发性上颌窦癌。上颌窦癌可源于任何一处的窦上皮，并向窦内及邻近组织浸润扩散，根据位置的不同而出现不同的早期症状。Ohngren曾倡议自内眦到下颌角做一假想连线，将上颌窦分为外上与内下两部分，或称为后上(上部)结构和前下(下部结构)两部分。

发明内容

本发明的目的是针对现有技术中的不足，提供一种诊断上颌窦癌的富含半胱氨酸分泌蛋白1试纸。

为实现上述目的，本发明采取的技术方案是：一种诊断上颌窦癌的富含半胱氨酸分泌蛋白1试纸，包括底板、样品垫、金胶垫、硝酸纤维膜层和吸水纸层，所述的底板上依次覆盖样品垫、金胶垫、硝酸纤维膜层和吸水纸层，其特征在于，所述的硝酸纤维膜层上含有牛血清白蛋白-唾液富含半胱氨酸分泌蛋白1偶联物的测试线和抗鼠二抗的质控线，所述的金胶垫上含有胶体金与抗唾液富含半胱氨酸分泌蛋白1抗体结合形成的金标抗唾液富含半胱氨酸分泌蛋白1抗体复合物，所述的试纸的诊断样品是唾液，所述的试纸的检测阙值为唾液富含半胱氨酸分泌蛋白1浓度10-40ng/ml。

所述的金胶垫由玻璃纤维和固定其上的金标抗体组成，所述的样品垫为吸水性玻璃纤维层。

本发明优点在于：提供了富含半胱氨酸分泌蛋白1的新用途，为上颌窦癌的大规模人群筛查、上颌窦癌术后病人的自我检测提供方便、可靠、无创、价廉的方法，指导上颌窦癌的治疗；本发明的试纸检测快速、灵敏度高、特异性强、稳定性好、操作简便、无需任何仪器设备，而且结果判断直观可靠、易于掌握，同时也方便病人对病情自我监测。

附图说明

附图1是上颌窦癌的CRISP1诊断试纸的结构示意图。

附图2是上颌窦癌的CRISP1诊断试纸的检测结果示意图。

附图3是上颌窦癌的CRISP1诊断试纸的检测过程示意图。

具体实施方式

下面对本发明提供的具体实施方式作详细说明。

实施例1

下面结合附图对本发明提供的具体实施方式作详细说明。

附图中涉及的附图标记和组成部分如下所示：

1.底板           2.样品垫

3.金胶垫         4.硝酸纤维膜层

5.吸水纸层       6.唾液

7.层析方向

实施例1免疫组化

实验材料：正常窦上皮组织、上颌窦癌组织；一抗为羊抗人CRISP1抗体，二抗驴抗羊Dylight594抗体。

实验方法：

组织芯片就是将大量组织样品有序地组合在一个微小基片表面,借助免疫组织化学的方法进行检测。

1、将组织用PFA固定液固定5分钟，PBS洗10分钟

2、抗原修复：用0.01M柠檬酸盐溶液暴露抗原决定族。微波炉高火3分钟加热修复液至沸腾（4分钟），再连续低火微波1分钟、两次。冷却至室温，PBS洗10分钟。用0.5%的Triton破膜10分钟。

3、封闭非特异性蛋白

1)  PBS 浸泡3分钟×3次

2)  3% H₂O₂-甲醇（30% H₂O₂10ml+甲醇90ml）室温浸泡30分钟

3)  自来水冲洗10分钟，PBS 浸泡3分钟×3次，甩干或纸巾吸去多余液体（勿碰到组织），用组化笔在组织周围画上圈（蒸馏水冲洗时间内配好10%封闭血清）

4)  在圆圈内组织内迅速滴入5% BSA（用PBS配制），封闭非特异性抗原（勿让组织干燥，应在纸巾吸掉水后立即加入），室温30分钟（配好一抗），扣掉封闭液，不洗。

4、一抗孵育

甩去切片上的BSA,用滤纸擦干组织周围残留BSA，直接加入已稀释的羊抗人CRISP1抗体（约60μl），放入湿盒中4℃过夜。第二天从冰箱中取出需37 ℃复温30 min。

5、二抗孵育

1)  将一抗洗掉，将玻片插入塑料玻片架，然后整个放入塑料盒中，加PBS浸泡放于微型振荡器上洗10分钟。