[发明专利]以圆酵母菌株连续发酵提取生产赤藓糖醇的方法

权利要求书

1.一种以圆酵母菌株连续发酵提取生产赤藓糖醇的方法，其特征是：

（1）细胞液体培养物的制备：挑取YPD固体培养基上的圆酵母（Torula.sp）B84512菌株一环，接种在装有50mL种子培养基的500 mL锥形瓶中，在25-35℃下，置于摇床上以150-200 r/min的转速培养30-48h至对数期，即制得圆酵母（Torula.sp）B84512菌株的细胞液体培养物；

YPD固体培养基如下：酵母粉10 g/L；蛋白胨20 g/L；葡萄糖20 g/L；pH 7.0，121℃高压蒸汽灭菌20min；固体YPD培养基在液体培养基的基础上加入20 g/L琼脂粉；

种子培养基：葡萄糖200 g/L，酵母粉10 g/L，尿素1 g/L，CuSO₄ ?5H₂O 0.01 g/L，MnSO₄? H₂O 0. 01 g/L，PH自然，其余为纯水，115℃高压蒸汽灭菌15min；

（2）准备发酵培养基，培养基成分按重量百分比计如下：葡萄糖20%-30%，酵母粉0.5%-1%，CuSO₄·5H₂O 0.0005%-0.001%，MnSO₄?H₂O 0.0005%-0.001%，其余为纯水，pH自然，110-120℃、0.1-0.2MPa蒸汽灭菌10-20min，待用；

（3）发酵装置连接：补料瓶（1）与5L发酵罐（2）相连，5L发酵罐（2）依次连接微滤膜（3）、纳滤膜（4），纳滤膜（4）与赤藓糖醇储罐（5）连接；

（4）发酵培养条件：将步骤（1）制备的圆酵母（Torula.sp）B84512菌株的细胞液体培养物以重量比，即细胞液体培养物的重量占发酵培养基4%-8%的接种量接种在装有已灭菌的2-3L发酵培养基的5L发酵罐（2）中，在温度为28-30℃，转速为300-600r/min，通气量为0.5-1vvm的条件下发酵培养60-84h；

当5L发酵罐（2）中赤藓糖醇浓度达到60g/L时，通过微滤膜（3）过滤发酵体系，滤液继续经纳滤膜（4）过滤，被微滤膜（3）截留的大分子液体以0.5-1mL/min的流速回流至发酵体系再利用；通过纳滤膜（4）选择性过滤后，即得到赤藓糖醇的发酵液，储存于赤藓糖醇储罐（5）中，被纳滤膜（4）截留的液体以0.5-1mL/min的流速回流至发酵体系；同时以0.4-0.6mL/min的速度流加质量浓度为15%-25%的葡萄糖，为发酵体系提供充足的底物，并维持发酵总体积不变，不断发酵培养即可连续发酵提取得到赤藓糖醇的发酵液。

2.如权利要求1所述以圆酵母菌株连续发酵提取生产赤藓糖醇的方法，其特征是：所述葡萄糖底物转化率达到45%以上，赤藓糖醇的发酵液提取收率达到97%。

3.如权利要求1所述以圆酵母菌株连续发酵提取生产赤藓糖醇的方法，其特征是：所述微孔滤膜的过滤孔径为0.1-1μm；纳孔滤膜的过滤孔径为0.1-100nm。