[发明专利]一种诊断舌癌的CRISP1试剂盒的应用

说明书

技术领域

本发明涉及试剂盒的应用，具体地说，是关于诊断舌癌的CRISP1试剂盒的应用。

背景技术

舌癌早期可表现为溃疡、外生与浸润3种类型。有的病例的第一症状仅为舌痛，有时可反射至颞部或耳部。外生型可来自乳头状瘤恶变。浸润型表面可无突起或溃疡。溃疡型及浸润型癌常伴有自发性疼痛和程度不同的舌运动受限；外生型一般舌运动障碍不明显，较少自发痛。舌癌进入晚期可直接超越中线或侵犯口底，亦可浸润下颌骨舌侧骨膜、骨板或骨质。向后则可延及舌根或咽前柱和咽侧壁。此时舌运动可严重受限、固定、涎液增多外溢。进食、吞咽、言语均感困难。疼痛剧烈，可反射至半侧头部。关于舌癌早期诊断的医疗器械目前还未见报道。

发明内容

本发明的目的是针对现有技术中的不足，提供诊断舌癌的CRISP1试剂盒的应用。

为实现上述目的，本发明采取的技术方案是：一种诊断舌癌的富含半胱氨酸分泌蛋白1试纸在制备诊断舌癌的医疗器械中的应用，所述的试纸，包括底板、样品垫、金胶垫、硝酸纤维膜层和吸水纸层，所述的底板上依次覆盖样品垫、金胶垫、硝酸纤维膜层和吸水纸层，所述的硝酸纤维膜层上含有牛血清白蛋白-唾液富含半胱氨酸分泌蛋白1偶联物的测试线和抗鼠二抗的质控线，所述的金胶垫上含有胶体金与抗唾液富含半胱氨酸分泌蛋白1抗体结合形成的金标抗唾液富含半胱氨酸分泌蛋白1抗体复合物，所述的试纸的诊断样品是唾液，所述的试纸的检测阙值为唾液富含半胱氨酸分泌蛋白1浓度10-40ng/ml。

本发明优点在于：提供了富含半胱氨酸分泌蛋白1的新用途，为舌癌的大规模人群筛查、舌癌术后病人的自我检测提供方便、可靠、无创、价廉的方法，指导舌癌的治疗；本发明的试纸检测快速、灵敏度高、特异性强、稳定性好、操作简便、无需任何仪器设备，而且结果判断直观可靠、易于掌握，同时也方便病人对病情自我监测。

附图说明

附图1是舌癌的CRISP1诊断试纸的结构示意图。

附图2是舌癌的CRISP1诊断试纸的检测结果示意图。

附图3是舌癌的CRISP1诊断试纸的检测过程示意图。

具体实施方式

下面对本发明提供的具体实施方式作详细说明。

下面结合附图对本发明提供的具体实施方式作详细说明。

附图中涉及的附图标记和组成部分如下所示：

1.底板           2.样品垫

3.金胶垫         4.硝酸纤维膜层

5.吸水纸层       6.唾液

7.层析方向

实施例1免疫组化

实验材料：正常舌组织、舌癌组织；一抗为羊抗人CRISP1抗体，二抗驴抗羊Dylight594抗体。

实验方法：

组织芯片就是将大量组织样品有序地组合在一个微小基片表面,借助免疫组织化学的方法进行检测。

1、将组织用PFA固定液固定5分钟，PBS洗10分钟

2、抗原修复：用0.01M柠檬酸盐溶液暴露抗原决定族。微波炉高火3分钟加热修复液至沸腾（4分钟），再连续低火微波1分钟、两次。冷却至室温，PBS洗10分钟。用0.5%的Triton破膜10分钟。

3、封闭非特异性蛋白

1)  PBS 浸泡3分钟×3次

2)  3% H₂O₂-甲醇（30% H₂O₂10ml+甲醇90ml）室温浸泡30分钟

3)  自来水冲洗10分钟，PBS 浸泡3分钟×3次，甩干或纸巾吸去多余液体（勿碰到组织），用组化笔在组织周围画上圈（蒸馏水冲洗时间内配好10%封闭血清）

4)  在圆圈内组织内迅速滴入5% BSA（用PBS配制），封闭非特异性抗原（勿让组织干燥，应在纸巾吸掉水后立即加入），室温30分钟（配好一抗），扣掉封闭液，不洗。

4、一抗孵育

甩去切片上的BSA,用滤纸擦干组织周围残留BSA，直接加入已稀释的羊抗人CRISP1抗体（约60μl），放入湿盒中4℃过夜。第二天从冰箱中取出需37 ℃复温30 min。

5、二抗孵育

1)  将一抗洗掉，将玻片插入塑料玻片架，然后整个放入塑料盒中，加PBS浸泡放于微型振荡器上洗10分钟。

2)  用滤纸将圆圈周围的水吸去，加入二抗驴抗羊Dylight594抗体，室温30分钟。

3)  加PBS浸泡放于微型振荡器上洗10分钟。