[发明专利]一种DNA明胶纳米微凝胶防伪涂料制备方法

权利要求书

1.一种DNA明胶纳米微凝胶防伪涂料制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤一、从泡桐树叶、小牛胸腺或大肠杆菌DH5αDNA中，通过聚合酶链式反应（PCR），扩增一段长度为400-900bp的DNA片段；

步骤二、将5-10%（w/v）的明胶溶液，45℃条件下加入体积比1：1-1：5的丙酮中，弃掉上清，冷冻干燥，得到纯化明胶，并配成5%（w/v）纯化明胶溶液；

步骤三、取1-2mL步骤二中所得纯化明胶溶液于50mL烧杯中，在50℃，200-600转/分钟的搅拌速度下，加入50-500μL步骤一所得DNA溶液，按照0.5mL/s的速率滴加2-5mL浓度2mol/L醋酸钠溶液，并补加蒸馏水使溶液的总体积为10mL，继续搅拌10分钟；加入0.5mL表面活性剂，并将体系温度降到15-30℃，继续搅拌30分钟；

所述步骤三中的表面活性剂包括吐温-20、吐温-40、吐温-60、吐温-65、吐温-80、吐温-85、司盘-20、司盘-40、司盘-60、司盘-80中的一种；

步骤四、逐滴滴加蛋白沉淀剂，至溶液浑浊，并在1分钟内不再澄清，加入溶剂化试剂至溶液澄清，搅拌30分钟；

所述的蛋白沉淀剂为硫酸钠、硫酸铵或氯化钠中的一种，或者其中两种以上任意比例的混合物；

所述的溶剂化试剂为乙醇、异丙醇中的一种或这两种任意比例的混合物；

步骤五、加入50-100μL的交联剂交联0-90秒，随后加入2.0-5.0mL浓度12%(w/v)偏重亚硫酸钠溶液终止交联反应，持续搅拌10h后，4℃静置过夜；

所述交联剂为甲醛、戊二醛、甘油醛、表氯醇、氰酸酯、氧化葡聚糖中的一种或者其中两种以上的混合物；

步骤六、透析72小时，真空冷冻干燥12小时得到白色粉末即DNA明胶纳米微凝胶；取0.005-0.05g该粉末溶解到10mL酯胶清漆中，混匀，即可制成DNA明胶纳米微凝胶的防伪涂料。

2.根据权利要求1所述的一种DNA明胶纳米微凝胶防伪涂料制备方法，其特征在于，步骤一的扩增具体为：从已知泡桐树叶树、小牛胸腺或大肠杆菌DH5α基因序列，使用Primer Pemier5.0软件设计对应引物，Oligo6.0软件评价引物质量并计算其退火温度值，按照如下体系以及热循条件，进行聚合酶链式反应扩增条件如下：50μL体系，其中包括10×PCR缓冲液5μL、1.0g/L模板DNA1μL、5.0U/μL TaqDNA聚合酶0.25μL、2.5mmol/L dNTP4μL、20μmol/L引物上下游各1μL；扩增程序：95℃变性10分钟；95℃变性60秒，55.2℃退火60秒，72℃延伸60秒，共25个循环；72℃再延伸5分钟反应终止。