[发明专利]截短侧耳素在提高达托霉素产量中的应用

说明书

技术领域

本发明属于微生物发酵领域，特别涉及截短侧耳素在提高达托霉素产量中的应用。

背景技术

达托霉素是从玫瑰孢链霉菌（Streptomyces roseosporus）发酵衍生得到的一种新型环脂肽类抗生素，由美国Cubist制药公司开发的全球第一个环脂肽类药物。达托霉素由连接到一个环状13-氨基酸肽的N-末端色氨酸上的癸酰基侧链构成，肽环由氨基酸和非蛋白质源氨基酸（如：Asn，OmAsp，3mGlu等）按照酰胺键或酯键构成肽环或羧酸肽环，为典型的环脂肽类化合物。达托霉素具有良好的广谱抗革兰氏阳性菌的活性，它对15个属35个种的革兰氏阳性菌都有抑制作用，尤其是耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌、耐万古霉素的金黄色葡萄球菌和耐万古霉素的肠球菌等效果明显。达托霉素的作用机制是通过扰乱细胞膜对氨基酸的转运，从而阻碍细菌细胞壁肽聚糖的形成和改变膜的性质，同时还能破坏胞内RNA和DNA的合成，最终抑制细菌的生长。由于达托霉素的作用机制完全不同于β内酰胺类，氨基糖苷类，糖肽类和大环内酯类等抗生素，因此很难引起和其他抗生素发生的交叉耐药问题，被称为抗耐药性抗生素的“最后一道防线—万古霉素的替代品”。

2003年9月美国食品与药物管理局（FDA）经过快速审理程序批准达托霉素注射用于治疗由革兰阳性敏感菌株引起的并发性皮肤及皮肤结构感染，如脓肿、手术切口感染和皮肤溃疡。随后，美国和欧盟又批准了其新的临床适应症，心脏感染和菌血症等。此外，该药其他数项用于组织感染，耐药菌治疗的研究也已进入临床Ⅱ、Ⅲ期阶段。但是玫瑰孢链霉菌发酵生产达托霉素的发酵效价低，难以实现产业化，因此选育高产菌株成为当前研究工作的主要目标。目前在抗生素高产菌的选育中，传统的化学、物理诱变仍是普遍应用而且十分有效的方法。但由于传统诱变方法所产生的突变是随机的，突变无方向性，导致目前菌株的筛选工作量大，直接影响了诱变育种的工作效率。因此，急需一种快速的、有效的筛选高产达托霉素的菌株，有利于实现产业化生产。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的之一在于提供一种截短侧耳素在提高达托霉素产量中的应用，其方法简单，筛选工作量小，能够快速获得稳定的、高产的菌株。

为实现上述发明目的，本发明提供如下技术方案：

截短侧耳素在提高达托霉素产量中的应用。

优选的，截短侧耳素在提高玫瑰孢链霉菌（Streptomyces roseosporus）达托霉素产量中的应用。优选的，所述玫瑰孢链霉菌为玫瑰孢链霉菌NRRL15998。

更优选的，所述截短侧耳素的有效剂量为60～200μg/mL。

本发明的有益效果在于：本发明公开了一种截短侧耳素在提高达托霉素产量中的应用，截短侧耳素由高等真菌产生的一种二萜类兽用抗生素，主要作用于细菌50S核糖体亚基使其发生重排，通过抑制肽基转移酶的活性而使细菌蛋白质合成受阻，因此获得高产菌株的效率更高；而传统方法主要通过诱变筛选高产菌株，但是诱变过程中的突变是随机的，无方向性，导致菌株的筛选工作量大，直接影响了诱变育种的工作效率，而本发明可以直接通过截短侧耳素，然后经发酵筛选就能获得高产达托霉素的菌株，筛选工作量小；本发明的实施便于达托霉素实现产业化生产，同时也拓宽了截短侧耳素的应用领域。

附图说明

为了使本发明的目的、技术方案和有益效果更加清楚，本发明提供如下附图：

图1为筛选抗截短侧耳素的玫瑰孢链霉菌（a：AS-1培养基；b：含浓度为150μg/mL截短侧耳素的AS-1培养基；1表示玫瑰孢链霉菌NRRL15998；2表示玫瑰孢链霉菌pl；3表示玫瑰孢链霉菌pl11）。

图2为玫瑰孢链霉菌NRRL 15998与抗截短侧耳素的玫瑰孢链霉菌发酵液中达托霉素含量。

图3为玫瑰孢链霉菌NRRL 15998、玫瑰孢链霉菌pl和玫瑰孢链霉菌pl11发酵过程中发酵液中达托霉素含量。

具体实施方式

以下将参照附图，对本发明的优选实施例进行详细的描述。优选实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件或按照制造厂商所建议的条件。

一、材料和方法

本发明使用的菌株为玫瑰孢链霉菌NRRL 15998（Streptomyces roseosporus NRRL15998），购自美国标准生物品收藏中心（ATCC）。