[发明专利]一种金鳟与硬头鳟杂交三倍体苗种的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及水产生物育种技术领域，具体地涉及一种金鳟与硬头鳟杂交三倍体苗种的制备方法。

背景技术

鲑鳟鱼是世界目前主要养殖的鱼类之一,由于其自身的品质和对生活环境的特殊要求,决定了它绿色、环保营养食品的性质,因此颇受消费者的青睐。鲑鳟鱼是我国目前主要的冷水性养殖鱼类,随着我国鲑鳟鱼养殖的迅速发展，基础理论研究相对滞后，鲑鳟鱼亲鱼种质退化导致苗种质量退化生产效益下降等问题逐渐突出，从而制约了鲑鳟鱼养殖业的可持续发展。利用现代生物技术，培育生长迅速、个体大、肉质好、抗病能力强的种苗，将成为我国鲑鳟鱼养殖业的持续、稳定、健康发展的必由之路。

杂交能够急剧的动摇遗传的保守性，使杂种的遗传性富于游动性，具有更大的可塑性，从而能迅速和显著地提高杂种的生活力，从而获得杂种优势；杂种能丰富遗传结构，通过杂交将两个以上遗传基础不同的品种或种以上个体的基因自由组合，出现新的遗传类型，继而人们可以选择优良的个体，培育成新品种。

与普通的二倍体鱼类相比，三倍体鱼类具有生长速度快、成活率高、抗病力强、肉质好、安全健康等优点：①三倍体鱼类生长速度比二倍体快30-40%，有利于生产大型个体，可有效的提高群体产量；②鲑科三倍体鱼类不育，避免了性腺发育阶段和产卵季节因能量转移和婚姻色出现而导致的鱼肉品质下降及表观特征变化，避免了其繁殖期生物学死亡，延长养殖周期；③三倍体鱼类对环境没有潜在的威胁，三倍体可减少鱼类的基因混杂，有效控制自然水域中鱼类的过度繁殖，避免养殖品种的退化，保护物种的多样性；④没有外来基因，属于人类可以安全食用的健康食品，比起转基因技术更为人们所接受；⑤三倍体鱼肉质鲜嫩、可食部分高、体形稳定美观、商品价值高。由于三倍体鱼类具有上述优势，因此通过三倍体制备技术获得生长快速、适应性和抗病力强的优质苗种具有巨大的潜力。

自上世纪80年代以来,三倍体鱼类的人工诱导工作取得了长足进展。目前对三倍体苗种制备的研究主要集中在纯种虹鳟鱼的三倍体制备，其方法为热休克法或静水压方法。现有热休克方法制备纯种三倍体虹鳟鱼的技术依赖于精确的温度，温度稍未变换，会导致苗种畸形率高，使培育效果不稳定，始终无法形成规模化生产，其原因为现有的纯种生产三倍体苗种制备技术或无法达到生产要求的三倍体率或无法达到可用于生产的苗种成活率，一直无法实现规模化生产。因此，迫切需要一种技术成熟、效果稳定且能规模化生产的三倍体鱼苗制备技术，提高受精卵的发眼率和苗种三倍体率。

6-二甲基氨基嘌呤（N6-Dimethyladenine,6-DMAP）在多种贝类多倍体诱导中取得了良好效果，但由于鲑鳟鱼对生长环境水质要求较高，特别对化学物质敏感，至今未有6-二甲基氨基嘌呤应用于鲑鳟鱼三倍体或杂交三倍体诱导的成功报道。

发明内容

本发明的目的在于提供一种金鳟与硬头鳟杂交三倍体苗种的制备方法，以克服现有技术的不足。

本发明提供的金鳟与硬头鳟杂交三倍体苗种的制备方法，包括以下步骤：

1）使金鳟亲鱼卵子与硬头鳟亲鱼精子杂交受精；

2）6-二甲基氨基嘌呤处理受精卵；

3）受精卵在养殖用水中孵化。

其中，步骤1）受精温度是6-8℃。

步骤1）金鳟亲鱼、硬头鳟亲鱼培养水温为10-13℃，流水池水交换量为2h/次。

所述步骤1）分别将硬头鳟亲鱼鱼卵和精液取出，精液用孵化用水清洗，方法为精液与孵化用水的体积比为1-1.5：2500-3000，搅拌1-1.5min后倒掉水，同样方法反复冲洗3-5次；按照雄性亲鱼与雌性亲鱼1：2-4的尾数比例进行精子与卵子的受精。

本发明制备方法的步骤2）中，受精卵在受精12-14min后，将受精卵移入170-190mg/L的6-二甲基氨基嘌呤（6-DMAP）溶液中浸泡处理。

优选地，受精卵在受精12min后，移入6-二甲基氨基嘌呤溶液中浸泡处理。

6-二甲基氨基嘌呤溶液的温度为12-14℃。浸泡时间为14-16min。

将步骤2）浸泡处理的受精卵迅速移入6-8℃孵化水体中孵化48-60天，得到杂交三倍体仔鱼。

本发明还提供了6-二甲基氨基嘌呤（6-DMAP)在制备金鳟与硬头鳟杂交三倍体苗种中的应用。

进一步地，采用浓度为170-190g/L、温度为12-14℃的6-二甲基氨基嘌呤溶液处理金鳟与硬头鳟受精卵，时间为14-16min。