[发明专利]一种毛兰菲的制备方法

说明书

技术领域

本发明属于天然药物化学领域，特别是涉及一种毛兰菲的制备方法。

背景技术

毛兰菲（confusarin）化学名称2、7-二羟基一1、5、6-三甲氧基菲，无色片状结晶，熔点191.1-192℃，分子量300，分子结构式：

。

毛兰菲为酚类化合物，易溶于氯仿、丙酮、甲醇等有机溶剂，极微溶于水。马国祥等研究发现毛兰菲(eonfusarin)对体外培养的肿瘤细胞株K562的生长具有不同的抑制作用，其细胞增殖抑制率为50%的药物浓度分别为0.0065、5.34、0.32、46.15μg/ml毛兰菲(eonfusarin)还有抗氧化活性，对三价铁硫氰酸盐的抗氧活性较BHA强。现有制备鼓毛兰菲的方法，多采用常压、常规试剂提取，提取效率低，而且后续纯化步骤繁琐，污染严重。如马国祥等人采用的方法是乙醇回流提取然后再采用硅胶柱层析，洗脱溶剂多，污染严重，很难放大生产。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种操作简便、污染小的毛兰菲的制备方法。

本发明的目的是采用以下技术方案实现的：一种毛兰菲的制备方法，其特征在于包含以下步骤：

1）将马鞭石斛原料粉碎20-80目，置于CO₂超临界萃取罐中萃取，CO₂流量为1-5ml/min/g原料，萃取温度30-60℃，压力20-30Mpa，萃取时间1-4h，萃取物用氯仿溶解，滤过，回收试剂得粗提物；

2）上述粗提物以氯仿、甲醇、水为溶剂系统，取上相做固定相、下相为流动相，采用高速逆流色谱纯化，主机转速700-1000rpm，流动相流速1-4ml/min，根据图谱收集流分，流分减压干燥即得。

步骤2）中的氯仿、甲醇、水为溶剂混合比例为：5-10:2-4:4-9。

采用本方法制备毛兰菲，提取效率高，纯化步骤简单易操作，而且污染小，易于工业化放大。

下面将结合具体实施方式进一步说明本发明，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。

具体实施方式：

实施例1：

将马鞭石斛原料粉碎40目，取2kg，置于超临界萃取罐中萃取，通入CO₂流量为3ml/min/g原料，在萃取温度40℃，压力25Mpa，萃取时间2h，萃取物用氯仿溶解，滤过，回收氯仿得粗提物。取氯仿、甲醇、水按5:2:5混合，取上层注入高速逆流色谱管做固定相，取下层做流动相，流速2ml/min，主机转速800rpm，流动相溶解粗提物，进样，根据图谱收集流分，连续制备，流分合并浓缩干燥，得毛兰菲1.5g，经HPLC检测，含量98.2%。

实施例2：

将马鞭石斛原料粉碎80目，取2kg，置于超临界萃取罐中萃取，通入CO₂流量为1ml/min/g原料，在萃取温度30℃，压力20Mpa，萃取时间3h，萃取物用氯仿溶解，滤过，回收氯仿得粗提物。取氯仿、甲醇、水按7:3:9混合，取上层注入高速逆流色谱管做固定相，取下层做流动相，流速3ml/min，主机转速900rpm，流动相溶解粗提物，进样，根据图谱收集流分，连续制备，流分合并浓缩干燥，得毛兰菲1.2g，经HPLC检测，含量95.7%。

实施例3：

将马鞭石斛原料粉碎60目，取2kg，置于超临界萃取罐中萃取，通入CO₂流量为6ml/min/g原料，在萃取温度35℃，压力27Mpa，萃取时间2h，萃取物用氯仿溶解，滤过，回收氯仿得粗提物。取氯仿、甲醇、水按9:3:7混合，取上层注入高速逆流色谱管做固定相，取下层做流动相，流速1ml/min，主机转速850rpm，流动相溶解粗提物，进样，根据图谱收集流分，连续制备，流分合并浓缩干燥，得毛兰菲1.1g，经HPLC检测，含量97.3%。