[发明专利]一种鼓槌菲的制备方法

说明书

技术领域

本发明属生物技术领域，特别是涉及一种鼓槌菲的制备方法。

背景技术

鼓槌菲（chrysotoxene），化学名称2-羟基-1，5，6，7-四甲氧基菲，分子式C₁₈H₁₈O₅，分子量314.34，为无色片状结晶，mp.177-178℃（石油醚-氯仿），分子结构式：

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鼓槌菲是一种从鼓槌石斛植物分离出的中药活性成分之一，具有抗肿瘤活性作用。现有制备鼓槌菲的方法，多采用常压、常规试剂提取，提取效率低，而且后续纯化步骤繁琐，污染严重。如马国祥等人采用的方法是乙醇回流提取然后再采用硅胶柱层析，洗脱溶剂多，污染严重，很难放大生产。

发明内容

本发明的要解决的技术问题是提供一种高效、低污染的鼓槌菲的制备方法。

为了实现上述目的，本发明采用以下技术方案：

一种鼓槌菲的制备方法，其特征在于：取鼓槌石斛原料粉碎20-80目，加入萃取釜，通入液态CO₂，在温度30~50℃、压力15~25MPa状态下萃取2-3小时，解析萃取物，萃取物加入二氯甲烷萃取，萃取液加入硅胶拌样烘干，石油醚~二氯甲烷混合溶液洗脱，分段收集流分，合并流分浓缩，冷藏结晶24小时，结晶物再用无水乙醇重结晶，干燥即得。

石油醚、二氯甲烷混合溶液洗脱为：先用体积比20:7的石油醚~二氯甲烷混合溶液洗脱6~10倍柱体积，再用体积比5:18的石油醚~二氯甲烷混合溶液洗脱。

本方法采用超临界CO₂萃取，效率高，周期短，提取产品纯度高，易于纯化，而且绿色环保。

下面将结合具体实施方式进一步说明本发明，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施例。

具体实施方式：

实施例1：

取2kg鼓槌石斛原料粉碎60目，加入萃取釜，通入液态CO₂，流速25kg/h，设置萃取温度35℃、压力22MPa状态下萃取3小时，在温度50℃、压力6Mpa解析萃取物，所得萃取物加入300ml二氯甲烷萃取，萃取液回收试剂加100g硅胶拌样烘干，装柱，先用体积比20:7的石油醚~二氯甲烷混合溶液洗脱6倍柱体积，再用体积比5:18的石油醚~二氯甲烷混合溶液洗脱，薄层检测，收集高浓度流分浓缩至100ml，冷藏结晶24小时，结晶物再用无水乙醇重结晶，干燥即得白色结晶2g，经UV、IR、MS、²HNMR、¹³CNMR等表征其物理性状的数据与现有技术相一致，含量97.5%。

实施例2：

取2kg鼓槌石斛原料粉碎80目，加入萃取釜，通入液态CO₂，流速30kg/h，设置萃取温度40℃、压力20MPa状态下萃取2小时，在温度55℃、压力7Mpa解析萃取物，所得萃取物加入300ml二氯甲烷萃取，萃取液回收试剂加150g硅胶拌样烘干，装柱，先用体积比20:7的石油醚~二氯甲烷混合溶液洗脱8倍柱体积，再用体积比5:18的石油醚~二氯甲烷混合溶液洗脱，薄层检测，收集高浓度流分浓缩至80ml，冷藏结晶24小时，结晶物再用无水乙醇重结晶，干燥即得白色结晶1.5g，经UV、IR、MS、²HNMR、¹³CNMR等表征其物理性状的数据与现有技术相一致，含量99.1%。

实施例3：

取2kg鼓槌石斛原料粉碎40目，加入萃取釜，通入液态CO₂，流速20kg/h，设置萃取温度45℃、压力26MPa状态下萃取4小时，在温度55℃、压力7Mpa解析萃取物，所得萃取物加入250ml二氯甲烷萃取，萃取液回收试剂加200g硅胶拌样烘干，装柱，先用体积比20:7的石油醚~二氯甲烷混合溶液洗脱9倍柱体积，再用体积比5:18的石油醚~二氯甲烷混合溶液洗脱，薄层检测，收集高浓度流分浓缩至120ml，冷藏结晶24小时，结晶物再用无水乙醇重结晶，干燥即得白色结晶1.8g，经UV、IR、MS、²HNMR、¹³CNMR等表征其物理性状的数据与现有技术相一致，含量98.8%。