[发明专利]马面鲀鱼头蛋白抗氧化肽及其制备方法和用途

说明书

技术领域

本发明涉及一种马面鲀鱼头蛋白抗氧化肽，本发明还涉及该马面鲀鱼头蛋白抗氧化肽的制备方法，本发明还涉及该马面鲀鱼头蛋白抗氧化肽的用途。

背景技术

研究表明人体新陈代谢和食品氧化变质产生的自由基均会对人体细胞和组织造成严重的氧化损伤，从而导致身体衰老、癌症、动脉硬化和心血管疾病等。因此，将抗氧化剂作为食品添加剂添加到日常膳食中可以帮助捕获并中和自由基，祛除自由基对人体的损害和保护食物免受氧化损伤变质。目前，食品行业普遍使用化学合成抗氧化剂，如BHA（叔丁基烃基茴香醚）、BHT（2, 6-二叔丁基对甲酚）、PG（没食子酸丙脂），除TBHQ外，在不同程度上对人体的肝脏、肾脏等器官均有不利影响。因此寻找高效、低毒的抗氧化剂成为人们的研究热点。近年来，人们研究发现水解蛋白质得到的多肽也具有良好的抗氧化活性，如大豆肽、乳蛋白肽和肌肽。

马面鲀为革鲀科马面鲀属的鱼类，俗名橡皮鱼、剥皮鱼、猪鱼、皮匠鱼，分布于朝鲜、日本、印度洋非洲东岸以及中国东海、黄海、上海地区见于长江口等海域，属于外海近底层鱼类。食用过程中，绿鳍马面鲀的鱼皮和鱼头常被作为废物丢掉，未能体现其应有的价值，同时也对环境造成了不良影响。因此，绿鳍马面鲀的鱼头和鱼皮的高值化利用成为研究的焦点，而利用活性肽开发的酶解技术，通过酶解、超滤分级和色谱精制等方法，研制一系列天然、高效、新颖的生物活性肽成为一种重要的途径。

 申请人在实验中发现，以马面鲀鱼头为原料，利用酶解技术制备抗氧化肽的工艺研究处于空白阶段，而以马面鲀鱼头蛋白酶解产物为材料制备高活性抗氧化肽及其应用也未见报道。

发明内容

本发明所要解决的第一个技术问题是针对上述的技术现状提供一种马面鲀鱼头蛋白抗氧化肽，该抗氧化肽安全无毒副作用，抗氧化活性强和易于消化吸收，可通过清除自由基达到抗氧化作用。

本发明所要解决的第二个技术问题是提供一种马面鲀鱼头蛋白抗氧化肽的制备方法，工艺科学合理、易操作。

本发明所要解决的第三个技术问题是提供一种马面鲀鱼头蛋白抗氧化肽的应用。

本发明为解决上述第一个技术问题所采取的技术方案为：一种马面鲀鱼头蛋白抗氧化肽，其特征在于该抗氧化肽的氨基酸序列为Leu-Ser-His-Gly-Pro-Tyr（LSHGPY），ESI-MS测定分子量为672 Da。

本发明为解决上述第二个技术问题所采取的技术方案为：一种马面鲀鱼头蛋白抗氧化肽的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

1）将洗净的马面鲀鱼头按固液比1 g：2 ~ 3 mL放入双蒸水中，用高速组织捣碎机将其处理成匀浆，然后按照体积比1：3 ~ 5放入乙醚中脱脂15 ~ 25 h，在3~5 ℃、4000 ~ 5000 rpm条件下离心15 ~ 20 min除去乙醚，收集固形物，冻干，即得到脱脂马面鲀鱼头粉末。

2）以脱脂马面鲀鱼头粉末作为原料，按固液比1 g：15 ~20mL加入磷酸盐缓冲液，用HCl或NaOH调节pH到5.7 ~ 7.0，得混合液；

3）将混合液温度升至55 ℃ ~ 6 5 ℃搅拌预热10 ~ 15 min，按照脱脂马面鲀鱼头质量的1.0 % ~ 1.5 %加入蛋白酶，酶解温度为55 ℃ ~ 65 ℃，酶解时间3 h ~ 5 h，得酶解液；

4）将得到的酶解液升温至90 ℃~ 95℃，并于此温度保持10 ~15min后，冷却至15 ~ 20 ℃，然后于4000 ~ 5000 rpm离心20 ~ 25 min，收集上清液，冻干得酶解物；再将酶解物溶解，经超滤分级和色谱精制得到马面鲀鱼头蛋白抗氧化肽。

作为优选，所述步骤3）中的蛋白酶为木瓜蛋白酶，酶活力≥1.5×10⁶ U/g。

作为改进，所述步骤4）的超滤分级和色谱精制的具体过程为：

超滤分级：将步骤4）得到的酶解物溶于pH 5.7 ~ 7.0的磷酸盐缓冲液制成浓度为10 ~ 15 mg/mL溶液，于0.1 ~ 0.15 MPa的工作压力和20 ~ 25 ℃的工作温度下采用超滤膜（截留分子量1 kDa）进行超滤处理，收集分子量小于1 kDa部分，冻干，得超滤酶解物；