[发明专利]一种用反相离子对色谱法测定替莫唑胺酯栓剂含量的方法

说明书

技术领域

本发明涉及医药领域，具体涉及一种替莫唑胺酯栓剂含量的测定方法。

背景技术

宫颈癌是严重威胁我国妇女健康的主要恶性肿瘤之一，每年新发病例15万，占全球发病的1/3。尽管死亡数据的趋势显示我国近年来宫颈癌死亡率有所下降，但从抽样调查数据仍可看到宫颈癌高发区的存在，特别是中西部农村地区，且患者趋于年轻化。随着宫颈癌筛查的广泛开展，越来越多的早期宫颈癌患者将被筛查出来，用于宫颈癌早期治疗的药物需求也日益突出。

替莫唑胺酯（Temozolomide Hexyl Ester）属于细胞毒类药物中的烷化剂类抗癌药，易于透过皮肤、粘膜等生理屏障，制成外用给药的栓剂后，局部血药浓度高，抗肿瘤效果好，适合治疗宫颈癌等疾病。

用替莫唑胺酯制备的栓剂有阴道栓或肛门栓，这些栓剂的制备采用现有的栓剂制备技术，如：将替莫唑胺酯直接分散于已熔化的基质中混匀，装入铸模，冷却后取出。其中栓剂基质材料包括：油脂性基质：如可可豆酯、脂肪酸酯、羊毛脂、石蜡等；水溶性和亲水性基质：如甘油、明胶、聚乙二醇类、聚氧乙烯单硬脂酸酯类等；根据需要，栓剂的配方中还可加入适量的表面活性材料：如吐温80、卡波姆、磷脂等；适量的防腐剂：如羟苯甲酯、羟苯乙酯、羟苯丙酯等。

现有技术中，替莫唑胺酯原料的含量检测采用反相高效液相色谱法，替莫唑胺酯栓的溶出度测定采用紫外分光光度法。这些方法应用于检测栓剂产品中的替莫唑胺之含量测定尚有不足。由于主要杂质和降解产物在替莫唑胺酯的最大吸收波长处亦有吸收，采用紫外分光光度法不能准确获得药物的实际含量；在采用高效液相色谱法测定栓剂含量测定时，难点就在于如何将被测组分从制剂中提取出来，祛除不必要的干扰物质。因此本发明提供一种高效液相色谱法检测替莫唑胺酯栓中替莫唑胺酯含量的方法，该方法灵敏度高，选择性强，准确性好，对产品质量的控制提供了一种好的方法。

发明内容：

本发明的目的在于提供一种用反相离子对高效液相色谱法测定替莫唑胺酯栓剂含量的方法，具体包括如下步骤：

（1）对照品溶液的制备；

（2）供试品溶液的制备；

（3）含量测定：吸取对照品溶液，供试品溶液，各10-20ul，注入高效液相色谱仪，记录色谱图，根据色谱图的峰面积，计算供试品中替莫唑胺酯的含量。

其中，步骤（1）中所述对照品溶液的制备方法如下：

称取替莫唑胺酯对照品适量，用流动相溶解并稀释成每1ml中含替唑胺酯0.025-0.075mg溶液，即得。

其中，步骤（2）中所述供试品溶液的制备方法如下：

取供试品替莫唑胺酯栓10粒，精密称定，切碎，混匀，精密称取适量（约相当于替莫唑胺酯50mg），置100ml容量瓶中，加乙腈至刻度，置45℃水浴振摇使替莫唑胺酯溶解，振荡仪上振荡2min后，再放入冰箱冷冻（-18℃）1小时后立即过滤，精密量取放至室温的续滤液1ml，置10ml容量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，经0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液，制成每1ml中约含0.05mg的溶液，作为供试品溶液。

其中，所述色谱条件如下：

色谱柱：Thermo公司ODS-2HYPERSIL（250mm×4.6mm，5μm）；

流动相为乙腈—醋酸钠和醋酸铵的混合溶液，体积比35-45∶55-65，其中，所述醋酸钠好醋酸铵的混合溶液含有0.03-0.05mol·L^-1醋酸钠与0.005-0.02mol·L^-1醋酸铵，醋酸钠好醋酸铵的混合溶液中还含有0.01mol·L^-1辛烷磺酸钠，其pH=2.5；

流速0.5-1.5mL·min^-1；

检测波长为300-350nm；

进样量：10-20μL；

柱温：30-50℃。

本发明优选的技术方案，包括如下步骤：

（1）对照品溶液的制备

精密称取替莫唑胺酯对照品适量，用流动相溶解并稀释成每1ml中含替唑胺酯0.05mg溶液，即得，

（2）供试品溶液的制备

取供试品10粒，精密称定，切碎，混匀，精密称取适量，置100ml容量瓶中，加乙腈至刻度，置45℃水浴振摇使替莫唑胺酯溶解，振荡仪上振荡2min后，再放入冰箱冷冻1小时后立即过滤，精密量取放至室温的续滤液1ml，置10ml容量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，经0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液，制成每1ml中含0.05mg的溶液，作为供试品溶液，