[发明专利]一种快速鉴别棉属种的方法

权利要求书

1.棉花叶绿体基因组中的转运RNA T和L的基因间区trnT-trnL以及转运RNA H和编码D1蛋白质的psbA基因的基因间区trnH-psbA的序列组合trnT-trnL+trnH-psbA作为棉属DNA条形码。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，使用引物对扩增棉花DNA，其中，上游引物TLF的核苷酸序列为：CGATGACCATCGCATTACAAAT，下游引物TLR的核苷酸序列为：GGCTCAATCCAATTAAGTCCGTA。

3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，使用引物对扩增棉花DNA，其中，上游引物HAF的核苷酸序列为：CCCCTACAATTACTATACTCTAT，下游引物HAR的核苷酸序列为：GACTTTGGTTTTAGTGTATACGA。

4.一种鉴定棉种的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

1）设计通用引物，对已有棉种进行有效扩增，所述通用引物对包括TL和HA，对于trnT-trnL，上游引物TLF的核苷酸序列为：CGATGACCATCGCATTACAAAT，下游引物TLR的核苷酸序列为：GGCTCAATCCAATTAAGTCCGTA，对于trnH-psbA，上游引物HAF的核苷酸序列为：CCCCTACAATTACTATACTCTAT，下游引物HAR的核苷酸序列为：GACTTTGGTTTTAGTGTATACGA；

2）提取目的棉种的棉花总DNA；

3）PCR扩增，利用步骤1）的通用引物对目的棉种的棉花总DNA进行降落PCR扩增；

4）PCR产物检测及克隆测序；

5）序列比对，参照条形码序列，去除测得序列的两端非目的片段序列，与DNA条形码进行比对，以确定棉种。