[发明专利]一种泡状番荔枝素的制备方法

说明书

技术领域

本发明属于天然药物化学领域，特别是涉及一种泡状番荔枝素的制备方法。

背景技术

泡状番荔枝素（Bullatanocin），CAS号129138-51-8，分子式C₃₇H₆₆O₈，分子量630.93，结构式为：

。

泡状番荔枝素是来源于番荔枝科(Annonaceae) 泡状番荔枝Annona bullata Rich.的树皮的一种乙酰精宁类化合物。研究表明，泡状番荔枝素具有细胞毒活性，对肺和结肠癌细胞株的细胞毒作用比阿霉素强10000倍，海虾试验(BST)的LC50为0.43μg/mL；具有抗肿瘤作用。对A－549、MCF－7和HT－29的ED50依次为5.15×10^-10μg/mL、0.0242μg/mL和1.66×10^-11μg/mL。大鼠线粒体生物测试的IC50为50.7nM/Lt/mg蛋白。目前，番荔枝科植物次生代谢物番荔枝乙酰精宁类化合物被视为新的抗肿瘤药物的潜在资源，是抗肿瘤药物的候选药物。

通过文献检索，国内尚未见从泡状番荔枝树皮中制备泡状番荔枝素的方法。

发明内容

本发明的目的是提供一种泡状番荔枝素的制备方法，工艺简单、提取率高，整个过程具有安全、无毒等优点。

本发明的目的是通过以下技术方案来实现的：

1、一种泡状番荔枝素的制备方法，其特征在于以下步骤：

a.取泡状番荔枝树皮粉碎，加入超临界萃取釜中，95%乙醇溶液为夹带剂，通入液态CO₂萃取，解析得萃取物；

b.上述萃取物用甲醇溶解，加少量中性氧化镁拌样，挥干溶剂，干法上氧化镁柱，石油醚-丙酮混合溶剂梯度洗脱，收集洗脱液减压浓缩得粗提物；

c.上述粗提物采用高速逆流色谱分离，紫外检测器监测，收集目标成分，冷藏结晶，得泡状番荔枝素。

步骤a中所述萃取压力28-35MPa、温度48-60℃， 萃取时间为50-100min，解析压力7.5-9MPa、温度38-45℃。

步骤a中所述CO₂流量为3.5-5ml/g生药/min。

步骤a中所述夹带剂用量为总萃取溶剂的12-15%。

步骤b中所述中性氧化镁为200目，石油醚-丙酮体积比为20-5:3。

步骤c中所述高速逆流色谱的溶剂系统为正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水组合，比例为5-7:6-8:2-5:3-5，下相为流动相，上相为固定相。

本发明的积极效果是：

1.采用超临界CO₂萃取，高效无溶剂残留，对环境无污染；

2.采用柱层析纯化，操作简单，处理量大；

3.采用高速逆流色谱分离，分离速度快，样品无损失，溶剂可以循环使用，适合连续制备。

具体实施方式：

下面将结合具体实施方式进一步说明本发明。

实施例1：

泡状番荔枝树皮粉碎，取1kg加入超临界萃取釜中，通入液态CO₂，设置萃取压力28MPa、温度48℃，达到上述参数后，调整液态CO₂流量为4ml/g生药/min，95%乙醇溶液为夹带剂，夹带剂用量为总萃取溶剂的15%，动态萃取100min，在压力7.5MPa、温度40℃下解析，所得萃取物加甲醇溶解后，加少量中性氧化镁拌样，挥干溶剂，干法上氧化镁柱，石油醚-丙酮20:3、11:3、5:3混合溶剂梯度洗脱，收集洗脱液减压浓缩得粗提物。取正己烷、乙酸乙酯、甲醇、水按6:8:4:5混合，混合充分分层后，取上相注满高速逆流色谱柱，同时开转主机850rpm，泵入下相做流动相，待系统平衡后，流速调节为3.5ml/min，同时用固定相溶解粗提物，由进样阀进样，紫外检测器监测，检测波长为208nm，收集目标流分，连续制备，冷藏流分，得结晶物，经HPLC检测，纯度98.1%。

实施例2：