[发明专利]果蝇基因lk6的新用途

说明书

技术领域

本发明涉及一种果蝇基因lk6的新用途。

背景技术

α-synuclein基因的聚集从而产生细胞毒性，导致多巴胺能神经元的选择性凋亡，而此类α-synuclein的聚集物正是黑质中的路易小体(LB)的主要成分。已有的研究显示α-synuclein表达产物的磷酸化在这个聚集过程中具有很重要的作用，尤其是第129位丝氨酸的磷酸化，这暗示，α-synuclein基因129位丝氨酸的磷酸化在PD发病过程具有一定的潜在的作用。

如今的研究表明，酪蛋白激酶(CK1和CK2) 、G蛋白偶联受体激酶家族(GRK2, GRK3, GRK5和 GRK6)等都具有磷酸化α-synuclein基因丝氨酸第129位的能力。

发明内容

本发明的目的之一在于提供一种lk6基因在制备调节α-synuclein基因丝氨酸129位磷酸化药物中的应用。

本发明的目的之二在于提供一种lk6基因在制备调节大脑多巴胺能神经元衰退药物中的应用。

本发明主要包括：构建过表达lk6基因的UAS-α-synuclein-elav-GAL4果蝇品系；DNA电泳检测α-synuclein基因和GAL4基因；果蝇行为学检测lk6基因对α-synuclein基因129位丝氨酸磷酸化的影响；免疫荧光的手段检测果蝇脑部lk6基因对α-synuclein蛋白129位丝氨酸的磷酸化程度的影响。

果蝇蛋白激酶lk6可以通过ERK信号通路调节α-synuclein 129位丝氨酸的磷酸化，本发明们首先构建了能够在果蝇中枢神经系统中同时表达lk6基因和α-synuclein基因的elav-GAL4-UAS-α-synuclein果蝇品系。然后通过DNA电泳手段鉴定α-synuclein基因和GAL4基因，再利用果蝇寿命检测和组织免疫荧光的手段检测果蝇脑部高级神经纤维网中α-synuclein基因蛋白产物在lk6基因的作用下的磷酸化情况。为全面研究PD的发病病因在模式生物果蝇中提供了进一步的依据和作用机制。

附图说明

       图1为DNA电泳鉴定3只随机取的elav-GAL4-UAS-α-synuclein果蝇品系的GAL4基因720bp（泳道1、2、3鉴定果蝇品系，泳道4为 w; elav-GAL4/+; +/+品系果蝇，泳道5为Marker，泳道6为清水模板对照）和α-synuclein基因423bp（泳道1为清水对照，泳道3、4、5为鉴定果蝇品系,泳道2为 w; +/+;UAS-α-synuclein/ +品系果蝇，泳道5为Marker，泳道6为清水模板对照）。

图2为过表达lk6基因后的果蝇寿命的行为学检测。果蝇数量约为100只，每隔3天检测一次，其中对照组蓝线果蝇品系基因型为w; elav-GAL4/+;+/+，PD果蝇品系红线基因型为w; elav-GAL4/+;UAS-α-synuclein/+，过表达lk6基因果蝇品系绿线基因型为w; elav-GAL4/+;UAS-α-synuclein/ UAS-lk6。

       图3为过表达lk6基因导致果蝇脑部高级神经纤维网中α-synuclein基因129位磷酸化蛋白产物的增多。

图4为过表达lk6基因使得果蝇背内侧神经集群中的多巴胺能神经元减少。

具体实施方式

实施例一：检测lk6基因在果蝇神经系统中对α-synuclein基因129位丝氨酸磷酸化的效果

1.       能够在果蝇中枢神经系统中同时表达lk6基因和α-synuclein基因的elav-GAL4-UAS-α-synuclein果蝇品系的构建。用w; elav-GAL4/Cyo; +/+ 品系与w;B1/Cyo;Tm2/Tm6B品系杂交得到w;elav-GAL4/Cyo;+/TM2品系。再用w; +/+; UAS-α-synuclein / UAS-α-synuclein品系与w;B1/Cyo;Tm2/Tm6B品系杂交得到w; +/ B1; UAS-α-synuclein /TM6B品系。然后用w;elav-GAL4/Cyo;+/TM2品系与w; +/ B1; UAS-α-synuclein /TM6B品系杂交获得w;elav-GAL4/B1; UAS-α-synuclein /TM2品系。最后将w;elav-GAL4/B1; UAS-α-synuclein/TM2品系自交获得w;elav-GAL4/B1; UAS-α-synuclein/ UAS-α-synuclein品系。