[发明专利]一种甜橙碱Ⅱ的提取方法

说明书

技术领域

本发明属于天然植物提取领域，具体涉及一种甜橙碱Ⅱ的提取方法。

背景技术

甜橙碱Ⅱ（Citrusinine Ⅱ），分子式C₁₅H₁₃NO₅，分子量287.27，结构式为

。

甜橙碱Ⅱ是从芸香科(Rutaceae)巴西甜橙Citrus sinensis Osbeck var.brasiliensis Tanaka的根皮中分离得到的一种吖啶类生物碱。实验研究表明，甜橙碱Ⅱ抗肿瘤促进作用。显著抑制EBV－EA活性，在1000分子比/TPA时，抑制率100%。

现有提取甜橙碱Ⅱ的报道并不多见，市场上也尚未有甜橙碱Ⅱ对照品的出售，因此提供一种甜橙碱Ⅱ的提取方法则很有必要，可以为其后续研究提供支持。

目前，国内尚未见甜橙碱Ⅱ的提取纯化方法方面的专利报道。

发明内容

本发明的目的在于提供一种甜橙碱Ⅱ的提取方法，该方法操作简单、得率高、安全环保，可快速大量分离高纯度甜橙碱Ⅱ。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：

一种甜橙碱Ⅱ的提取方法，其特征在于它包括以下步骤：

（1）提取：取巴西甜橙的根皮粉碎成粗粉，加入乙醇溶液，45-55℃下进行连续逆流超声提取，得到乙醇提取液；

（2）氧化铝柱层析：上述提取液浓缩至浸膏，加氧化铝拌匀、干燥后装柱，用氯仿-甲醇混合溶液洗脱，薄层检测，收集甜橙碱Ⅱ流分，浓缩干燥得到甜橙碱Ⅱ粗品；

（3）制备型液相色谱分离：上述粗品采用制备型液相色谱分离，紫外检测器在线监测，收集甜橙碱Ⅱ组分，将洗脱液旋转蒸发浓缩，得甜橙碱Ⅱ粗晶；

（4）重结晶：将甜橙碱Ⅱ粗晶用丙酮重结晶，冷冻干燥得到高纯度甜橙碱Ⅱ黄色晶体。

步骤（1）所述乙醇溶液浓度为85%，用量为药材的5-10倍（V/W）。

步骤（1）所述超声频率为60-80KHz。

步骤（1）所述提取时间为60-100min。

步骤（2）所述氧化铝为120目，氯仿-甲醇体积比为1:1，用量为柱体积的4-8倍。

步骤（3）所述制备型液相色谱的流动相为乙腈-0.25%乙二胺水溶液，体积比为31:69。

步骤（3）所述紫外检测波长为265nm。

步骤（4）所述丙酮为90-100%的丙酮水溶液。

本发明的优点在于：1）操作简单、耗时短，易于产业化放大；2）提取、柱层析、制备液相分离等步骤中的溶剂用量少，并可回收再利用；3）具有较高的经济效益和学术价值，本发明所得产品纯度高，可为甜橙碱Ⅱ的进一步开发提供药理原料和实践支持。

具体实施方式：

下面结合具体实施例对本发明进一步说明：

实施例1：

取巴西甜橙的根皮1kg，粉碎成粗粉，从连续逆流超声提取设备头部进料口进料，从连续逆流超声提取设备尾部溶剂加入口加入10倍85%乙醇溶液，55℃下进行连续逆流超声提取60min，超声频率为80KHz，得到提取液，提取液减压回收试剂得浸膏，向浸膏中加氧化铝（120目）拌匀、干燥后装柱，用7倍柱体积的氯仿-甲醇（1:1）混合溶液洗脱，薄层检测，收集甜橙碱Ⅱ流分，浓缩干燥得到甜橙碱Ⅱ粗品。以乙腈-0.25%乙二胺水溶液为流动相，体积比为31:69，色谱柱以C8键合相为填料，粒径为10μm，柱长为15cm、直径为4cm，将粗品加入流动相至刚好溶解，溶解后的溶液经0.45μm微滤膜过滤，得到样品溶液，六通阀进样，进样体积为25ml，控制流速为50ml/min，紫外在线检测，检测波长为265nm，收集目标成分，减压回收试剂得甜橙碱Ⅱ粗晶，用100%丙酮重结晶，冷冻干燥得到高纯度甜橙碱Ⅱ黄色晶体，经HPLC检测，纯度97.4%。

实施例2：