[发明专利]一种快速测定桑叶中单宁含量的方法

说明书

技术领域

本发明涉及植物成分分析技术领域，特别是涉及一种快速测定桑叶中单宁含量的方法。

背景技术

单宁又称鞣质，是由没食子酸(或其聚合物)的葡萄糖(及其多元醇)酯、环烷醇及其衍生物的聚合物以及两者混合共同组成的多元酚，在植物中广泛存在。单宁分为可水解型和缩合型（原花色素）两大类，近10年来低聚原花青素在欧、美、日等国家的保健品、化妆品领域得到广泛应用，享有“皮肤维生素”的美誉。单宁在制革工业中被广泛用来鞣制底革、工业用革、箱包革等。单宁也是百部、老鹤草等中草药的重要药效成分。

桑科桑属植物桑的叶是桑树的主要产物，约占地上部产量的64%，我国是世界上最大的桑树种植国，卫生部于1993年将桑叶列为药食两用植物。桑叶中含有较丰富的单宁。

要利用桑叶提取单宁，必须先知道桑叶单宁含量的高低。目前单宁含量的测定方法主要有、溶剂提取法、微波提取法等。热水提取法是利用水作溶剂，在高温下将单宁溶出后测定。该法的主要缺陷是测定时间长，重复过程多，提取效率较低，能耗高；溶剂提取法是利用甲醇、乙醇等极性有机溶剂将单宁溶出后测定，如用pH为3、浓度50%的乙醇提取百部3h，测定得到百部中单宁含量为0.93%。该法的主要缺点是提取时间长、溶出液中杂质较多，对测定数据的准确性影响较大。到目前为止，尚无有关快速测定桑叶中单宁含量方法的研究报道。

发明内容

鉴于目前单宁含量测定方法耗时的缺陷，本发明的目的在于提供一种快速测定桑叶中单宁含量的方法，该方法利用超声波技术快速地将桑叶中的单宁分离、提出，用于测定。

超声波是指频率为20千赫～50兆赫左右的机械波，它具有空化、高频振荡及微射流等多级物理效应。超声波的空化作用可产生极大的压力，造成细胞壁在瞬间破裂，细胞内物质充分释放出来；同时，超声波产生的振动作用可加强待提取物质的扩散及溶解。因此，利用超声波对细胞壁的破壁作用，使细胞内物质如单宁充分释放出来，缩短单宁提取时间、提高单宁提取率。

本发明依次通过下列步骤实现：

（1）单宁标准曲线的绘制：

称取单宁酸，加蒸馏水溶解、混匀，配制浓度为0.1mg/mL的单宁标准溶液；分别取单宁标准溶液0.0mL、1.0mL、2.0mL、3.0mL、4.0mL、5.0mL于各容量瓶中，加Folir-Denis试剂2.5mL及饱和碳酸钠溶液5.0mL，加水定容至50mL，充分混匀，静置30min后，以空白溶液调零，在750nm处测吸光度，根据单宁浓度与对应的吸光度值绘制得到标准曲线；

（2）桑叶中单宁的超声波提取：

将鲜桑叶放入80℃烘箱中烘干，粉碎成桑叶粉后放入容器中，加入质量比浓度为65%的乙醇溶液，桑叶粉与质量比浓度为65%的乙醇溶液的质量体积比为1g：25 mL，将容器放入超声波清洗机，在功率为120W，温度为65℃下提取15min，提取完成后，过滤，滤液保存备用；残渣中加入相同体积和浓度的乙醇溶液于相同条件下重复超声波提取，得到滤液，如此重复提取3次，合并滤液并按每0.5克桑叶粉定容至50mL定容，得提取液；

（3）桑叶中单宁的测定：

吸取提取液1.0mL于容量瓶中，加入Folir-Denis试剂2.5mL及饱和碳酸钠溶液5.0mL，加水定容至50mL并充分混合，静置30min后，以空白调零，于750nm处测吸光度，根据步骤（1）所得标准曲线计算桑叶中单宁的含量。

附图说明

图1为单宁标准曲线。

本发明的优点是

本发明方法在超声波的辅助作用下，用65%的乙醇溶液作溶剂，在很短的时间内（不超过1h）即可将桑叶中的单宁提取出来，提取时间大大缩短；而且可以根据超声波清洗机的大小同时测定数个乃至数十个桑叶样本，提高工作效率。

用本发明方法提取并测定桑叶中的单宁，加标回收率达到92%，RSD＜5%，符合分析方法的要求。

具体实施方式：

为了使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，下面对本发明的优选实施例子进行详细的描述。

实施例1：试剂的配制

（1）Folir-Denis试剂：称取钨酸钠100g、磷钼酸20g于1000mL烧瓶中，加水750mL溶解，再加入磷酸50mL。连接冷凝装置，在沸水浴上加热回流2h后，冷却至室温，加水定容到1000mL得Folir-Denis试剂，于棕色瓶中保存备用。