[发明专利]一种检测水中有机污染物遗传毒性的方法

说明书

技术领域

本发明属于水环境研究领域，涉及一种检测有机污染物遗传毒性的方法。

背景技术

环境污染加重，给人们的健康带来威胁。各种研究方法已开展对遗传毒性进行评价，自Heddle等首次提出微核试验至今，微核试验因其经济、简便易行、可信度高等优点越来越广泛的应用于染色体/纺锤体损伤效应的检测。

水环境中的遗传毒物能诱发鱼体产生微核，通过监测鱼类红细胞微核率的变化可研究外源物的遗传毒性和评价环境水质。目前，研究者已对多种鱼的红细胞微核试验的有效性进行讨论，国内学者应用中国传统鱼类鲫鱼、鲤鱼、鲢鱼及鳙鱼等成功地采取原位测试评价环境水质，证实鱼类外周血红细胞作为监测遗传毒物染色体损伤的生物标志物的可行性。而随着经济发展和工业化进程加剧，使得水体受大量有机污染物污染，其中许多属于致癌、致畸、致突变物质。对于水体中有机污染物对稀有鮈鲫外周血红细胞遗传毒性试验方法检测研究尚未开展。

发明内容

本发明的一个目的是提供一种检测样品中有机污染物的遗传毒性的检测方法，包含以下步骤：

(1)用待测样品的水溶液，暴露处理稀有鮈鲫；

(2)检测暴露处理后的稀有鮈鲫的外周血红细胞，统计细胞微核率。

所述检测方法是根据细胞微核率判断待测样品中有机污染物的遗传毒性。

所述步骤(1)中，在所述暴露处理前，稀有鮈鲫的外周血红细胞微核率为0.1‰。

所述步骤(1)中，所述暴露处理的方法为：将稀有鮈鲫置于所述含待测样品的水溶液中，放置期间每2-3d换暴露处理液一次，每次替换一半。

所述步骤(1)中，所述暴露处理过程中避光。

所述步骤(1)中，所述暴露处理的时间为21-28d；具体为28d。

所述步骤(1)中，所述待测样品的水溶液的配制方法为：将待测物溶于有机溶剂后再用水稀释即得。

所述步骤(2)中，所述检测暴露处理后的稀有鮈鲫的外周血红细胞的方法为：从步骤(1)暴露处理后的、处死后的稀有鮈鲫取血、涂片、固定、晾干、Giemsa应用液染色、洗净染液、晾干、镜检。

所述方法中，所述有机污染物为苯并[a]芘或4-硝基喹啉-1-氧化物。

本发明的另一个目的是提供稀有鮈鲫在检测水中有机污染物引起的遗传毒性中的应用。

所述应用中，所述有机污染物为苯并[a]芘或4-硝基喹啉-1-氧化物。

本发明的还一个目的是提供一种辅助检测水中有机污染物含量的方法，包含以下步骤：

(1)制作标准曲线：

A、制备一系列已知浓度的待测物溶于有机溶剂的溶液储备液，稀释于活性炭处理后水得到各种不同浓度的待测物水溶液；

B、分别用各种浓度的待测物水溶液暴露处理稀有鮈鲫；

C、检测暴露处理后的稀有鮈鲫的外周血红细胞，统计细胞微核率；

D、以细胞微核率为纵坐标，以所述待测物水溶液中待测物的浓度为横坐标，制作标准曲线；

(2)取待测水样，按照步骤B和C中相同的方法，对稀有鮈鲫进行暴露处理和统计细胞微核率；将细胞微核率代入上述步骤D中的标准曲线，即得到待测水样中待测物的含量。

所述步骤B中，在所述暴露处理前，稀有鮈鲫的外周血红细胞微核率为0.1‰。

所述步骤B中，所述暴露处理的方法为：将稀有鮈鲫置于所述含待测样品的水溶液中，放置，期间每2-3d换暴露处理液一次，每次替换一半。

所述步骤B中，所述暴露处理过程中避光。

所述步骤B中，所述暴露处理的时间为21-28d；具体为28d。

所述步骤C中，所述检测暴露处理后的稀有鮈鲫的外周血红细胞的方法为：从步骤B暴露处理后的、处死后的稀有鮈鲫取血、涂片、固定、晾干、Giemsa应用液染色、洗净染液、晾干、镜检。

所述方法中，所述有机污染物为苯并[a]芘或4-硝基喹啉-1-氧化物。

本发明与现有技术相比，具有如下优点：

1.稀有鮈鲫为中国特有小型试验鱼类，易于规范化研究，减少其他试验因素影响，其外周血红细胞微核试验能很好地检测水中有机污染物遗传毒性危害状况。

2.开发针对有机物暴露方式及暴露时间的微核测定技术，并绘制剂量-效应曲线，实现对遗传毒物毒性的定量化评价。

因此，本发明方法灵敏、简便、快捷、更直观、准确，结果重现性好，对于水质遗传毒性研究具有重要意义。

附图说明

图1为苯并[a]芘剂量-效应曲线。