[发明专利]一种从牛跟腱中提取胶原的方法

权利要求书

1.一种从牛跟腱中提取胶原的方法，其特征在于提取方法包括以下步骤：

（1）称重：称取新鲜牛跟腱，水洗法去除附属物。

（2）冷冻：在-40℃条件下冷冻保存12～24小时。

（3）切块：将冷冻的牛跟腱切成块状（0.5cm×0.5cm）。

（4）粉碎：将切成块状的牛跟腱在-40℃条件下冷冻6-12小时后置于粉碎机内粉碎。

（5）提取：将粉碎后的牛跟腱置于可控温的空层析柱内，其底部筛网的孔径为100～300目，连续将温度为38-45℃的去离子水从层析柱顶部注入到层析柱中，控制层析柱夹套的循环水温度与向层析柱内注入水的温度一致；收集从层析柱底部流出的溶液，为胶原粗提液。

（6）酶解：向胶原粗提液中加入蛋白酶，蛋白与酶的比例控制在50:1到200:1，在一定温度下搅拌24～36小时。

（7）精制：将酶解后的溶液过上样至亲和层析柱，层析介质的配基为一种多肽，其氨基酸序列为ICTTNEGVMYRIGDEWDKEHDMGHMMRCTCVGNGRGEWTC VAYSELRD，上样量为层析介质体积的5%～16%。使用水溶液将未吸附的蛋白或多肽淋洗出，采用10%～30%的乙腈-水溶液将吸附在层析介质上的蛋白洗脱出，收集洗脱液。

（8）冻干：将亲和层析法精制的胶原冷冻干燥，获得高纯胶原。

2.根据权利要求1所述的一种从牛跟腱中提取胶原的方法，其特征在于步骤（4）提取过程中，用于提取胶原的装置是可控温层析柱。

3.根据权利要求1所述的一种从牛跟腱中提取胶原的方法，其特征在于步骤（4）提取过程中层析柱夹套的循环水温度与向层析柱内注入水的温度相同。

4.根据权利要求1所述的一种从牛跟腱中提取胶原的方法，其特征在于步骤（7）胶原精制过程采用的层析方式为亲和层析。

5.根据权利要求1所述的一种从牛跟腱中提取胶原的方法，其特征在于步骤（7）胶原精制过程中亲和层析介质的配基是一种多肽ICTTNEGVMYRIGDEWDKEHDM GHMMRCTCVGNGRGEWTCVAYSELRD，或含有该序列的多肽。