[发明专利]2-氨基-4-（3′-氰基-4′-吡咯烷基）苯基嘧啶化合物的抗肿瘤应用

说明书

技术领域

本发明属于肿瘤化学物领域，特别是涉及2-氨基-4-（3′-氰基-4′-吡咯烷基）苯基嘧啶化合物的抗肿瘤应用。

背景技术

化疗是癌症临床治疗的重要手段，化疗药物通过直接杀死肿瘤细胞或者抑制肿瘤细胞的分裂增殖、促进细胞分化来达到治疗效果。探寻积极有效的预防途经及有效的治疗药物显得十分迫切和必要，特别是分子靶向治疗在肿瘤治疗中的应用，寻找有效、特异的抑制手段并探讨其作用机制，不仅有利于预防癌症的发生，还能为临床治疗提供新的途径。

近年来，人们逐渐发现另外两种非经典的IκB激酶（IKKs）——TBK1和IKKi，它们是机体受到病毒感染时启动干扰素信号通路的重要诱导剂，Toll样受体被病毒成分激活后，TBK1和IKKi与TRAF3、TANK组装，进一步在多个丝氨酸和苏氨酸残基位点磷酸化干扰素调节因子（IRF 3，7），IRF-3 和IRF-7 二聚化，入核诱导Ⅰ型干扰素基因等多种抗病毒基因的表达，从而激活先天性免疫途径。除了在抗病毒免疫反应中的角色外，非经典的IKKs还参与到其他信号通路中，例如肿瘤发生等。据报道某些转化细胞中TBK1激酶活性上调并且是这些转化细胞生存所必需的。通过RNAi技术抑制TBK1的表达可以诱导肿瘤细胞的凋亡，然而非肿瘤源性的上皮细胞却不依赖TBK1而生存。有基因组学研究表明IKKi是人乳腺癌的致癌基因，并且在人乳腺癌细胞中抑制IKKi可诱导乳腺癌细胞死亡。因而TBK1和IKKi在肿瘤学领域逐渐引起了人们重视。

本研究发现在同一肿瘤中TBK1和IKKi并非同时高表达或者固有激活状态，抑制其中一个表达会激活另一激酶。因此，由于这种两种激酶之间的重叠效应和代偿功能，单纯抑制TBK1或IKKi均不能有效抑制肿瘤细胞生长，然而当同时抑制这两种激酶这可以有效抑制肿瘤细胞增殖，因而提示了其可能成为治疗肿瘤的一个好的靶点。

发明内容

本发明旨在提供一种2-氨基-4-（3′-氰基-4′-吡咯烷基）苯基嘧啶化合物的抗肿瘤用途，为今后开发新型靶向抑制TBK1和IKKi抗肿瘤药物拓展新的思路和方法。

为了达到上述目的，本发明提供的技术方案为：   

本发明提供了一种具有抑制TBK1和IKKi的2-氨基-4-（3′-氰基-4′-吡咯烷基）苯基嘧啶化合物，本说明书中，该化合物简称为CMPD，CMPD结构式如下所示，其相关属性如下表所示。

化合物结构式

2-氨基-4-（3′-氰基-4′-吡咯烷基）苯基嘧啶的相关属性

本发明揭示了化合物CMPD存在通过抑制TBK1和IKKi诱导肿瘤细胞凋亡的机制，并发现了CMPD通过抑制TBK1和IKKi体内抗肿瘤的作用。经本发明研究发现， TBK1和IKKi这两种激酶之间具有重叠效应和代偿功能，单纯抑制TBK1或IKKi均不能有效抑制肿瘤细胞生长，然而当同时抑制这两种激酶这可以有效抑制肿瘤细胞增殖，化合物CMPD则能同时抑制这两种激酶，从而成为新型抗肿瘤药物的治疗靶点。

本发明还通过动物模型验证了化合物CMPD的抗肿瘤疗效，CMPD通过TBK1和IKKi双重抑制能成功抑制舌癌荷瘤裸鼠和前列腺癌FVB小鼠体内肿瘤的生长，且对小鼠机体无明显毒、副作用。该化合物的抗肿瘤作用与抑制AKT活化，下调VEGF表达，抑制肿瘤血管生成有关。本发明为今后进一步开发新型靶向抑制TBK1和IKKi的临床药物奠定基础。

附图说明

图1为本发明实施例1中TBK1和IKKi在多种肿瘤细胞中表达及活化情况。

图2为本发明实施例1中IKKi-siRNA SCC-25细胞和对照组的IKKi, p-TBK1, TBK1的蛋白表达水平。

图3为本发明实施例1中人舌癌细胞SCC-25中siRNA抑制TBK1或/和IKKi之后其细胞增殖水平。（** P<0.01差异具有统计学意义，siRNA干扰效率采用Western blotting验证）。

图4为本发明实施例2中RAW264.7细胞用LPS（1 μg/ml）处理不同时间后IRF-3和p-IRF-3的蛋白表达水平。

图5为本发明实施例2中RAW264.7细胞用不同浓度的CMPD处理1 hr后并用LPS（1 μg/ml）刺激1 hr的IRF-3和p-IRF-3的蛋白表达水平。