[发明专利]一种快速从土壤筛选产抗菌素的放线菌的方法

权利要求书

1.一种快速从土壤中筛选产抗菌素的放线菌的方法，其特征在于该方法包括以下步骤：

1）土壤样本的采集及处理：采集新鲜土壤，放入50mL灭菌塑料袋中，立即带回实验室，称取湿重样品5g于80℃烘干恒重，计算出5g干重土样所需湿重量；

2）培养：将步骤1）采集的相当于干重5g的湿重样本经梯度稀释液稀释后在65℃水浴恒温10min，接种于含有高氏一号培养基的培养皿里，培养7-12天；

3）挑选单菌落：将步骤2）中形成的单菌落数量最多的培养皿中所有的单菌落挑选出来进行转接；

4）长方形转接：将步骤3）所有单菌落编号，用接种环转接至新的高氏一号培养基上，划短线转接到新培养基中，在28℃培养7-12天，其中每个短线之间距离不少于7mm，每个10cm的培养皿至少可以转接35个单菌落；

5）筛选：用直径为4mm的不锈钢打孔器将生长有放线菌的琼脂培养基打成2块圆形的琼脂培养基块，用镊子分别夹取琼脂块放置于预先涂布测试的带细菌的培养基上，37℃培养18-24 h，观察抗菌活性，产生透明圈的即为有抗菌活性，其中抗菌活性大小R = 透明圈直径D - 琼脂块直径d；

6）将产生透明圈琼脂块的原始单菌落重复步骤4）、5）转接至少10次，进行分离纯化，得到稳定的抗菌素放线菌。

2.根据权利要求1所述的一种快速从土壤中筛选产抗菌素的放线菌的方法，其特征在于：梯度稀释培养液的培养方法为，将相当于干重5g的湿重样本加入灭菌水中，充分混匀，得到10^-1的稀释液；取5mL10^-1的稀释液加入灭菌水中，充分混匀，得到10^-2的稀释液；取5mL10^-2的稀释液加入灭菌水中，充分混匀，得到10^-3的稀释液。

3.根据权利要求1所述的一种快速从土壤中筛选产抗菌素的放线菌的方法，其特征在于：长方形转接中，划短线的长边长为8-10mm，宽为一个接种环划线宽度。

4.根据权利要求1所述的一种快速从土壤中筛选产抗菌素的放线菌的方法，其特征在于：一个原始单菌落通过长方形转接后可以直接测试两类不同的细菌：革兰氏阴性细菌和革兰氏阳性细菌。