[发明专利]一种人工生物肌腱及其制备方法

权利要求书

1.一种人工生物肌腱，其特征在于：采用近交系动物的小肠粘膜下层组织为原料，去除细胞成分和DNA成分，完整保留细胞外基质成分和结构，并具有微孔结构。

2.根据权利要求1所述的一种人工生物肌腱，其特征在于：所述近交系动物为近交系猪。

3.根据权利要求2所述的一种人工生物肌腱，其特征在于：所述近交系猪为中国近交系五指山小型猪。

4.根据权利要求1所述的一种人工生物肌腱，其特征在于：所述去除细胞成分和DNA成分后DNA残留量为105~130pg/g。

5.根据权利要求1所述的一种人工生物肌腱，其特征在于：所述微孔结构的孔径为150~250um，孔隙率为85~90%。

6.根据权利要求1-5所述的一种人工生物肌腱，其特征在于：由2~4层单层材料轴卷成柱形或由8~12层单层材料压制成条形，并具有贯穿性小孔，所述贯穿性小孔的孔径为0.5~2mm，孔间隔为0.5~1cm。

7.根据权利要求6所述的一种人工生物肌腱，其特征在于：所述贯穿性小孔为通过激光微孔技术打孔而成。

8.权利要求1所述的一种人工生物肌腱的制备方法，其特征在于包括以下操作步骤：

（1）动物源的确定和小肠组织的前置处理与初洗

选择近交系动物作为动物来源，动物品种的确定采用专利ZL200510008994.2所规定的方法，取新鲜屠宰动物的小肠组织清洗洁净，分离出小肠粘膜下层，使用注射用水冲洗3遍；

（2）病毒灭活

采用过氧乙酸-乙醇溶液法灭活病毒，该步骤在清洗槽可振荡的恒温超声波清洗器中进行，其中过氧乙酸的体积百分含量为0.05~0.2%，灭活时间为1~2h，温度范围为4~40℃，然后在磷酸盐缓冲液中清洗2~5次，每次15min，检测清洗后的磷酸盐缓冲液的pH值，当pH达到6.5-7.5后,以流动的注射用水清洗材料，检测电导率达到1.5um/s以下时终止；

（3）脱细胞

该步骤在清洗槽可振荡的恒温超声波清洗器中进行，首先将材料置入清洗槽中，然后在清洗槽中注入氢氧化钠溶液，开启清洗器，清洗时间为5~30min，氢氧化钠溶液浓度为5~100mmol/L，然后关闭清洗器，将氢氧化钠溶液倾出，注入磷酸盐缓冲液进行清洗，开启清洗器，清洗时间为5~20min，磷酸盐缓冲液重复清洗2~5次，检测清洗后的磷酸盐缓冲液的pH值，当pH达到6.5-7.5后,以流动的注射用水清洗材料，检测电导率达到1.5um/s以下时终止；

（4）DNA清除处理

该步骤在清洗槽可振荡的恒温超声波清洗器中进行，将氯化钠溶液注入清洗槽中，开启清洗器，清洗时间为5~30min，氯化钠溶液浓度为0.015mol/l或2mol/L，PH值不超过7.8、然后以流动的注射用水清洗材料，检测电导率达到1.5um/s以下时终止；

（5）成型

该步骤包括制具固定、冷冻干燥和激光微孔打孔3步，将材料2~4层轴卷成柱形或8~12层压制成条形，固定于制具上，然后用注射用水清洗洁净，将已固定于制具的材料放于冷冻干燥机中，按照预先设计的冻干流程进行冷冻干燥：预冻至25~50℃，保温0.5~4小时），升温至15℃，保温4~12小时，升温15℃，保温0.5~4小时，升温至25℃，保温4小时，冻干完成后，使用激光微孔打孔机打孔，孔径范围为0.5~2mm，孔间隔为0.5~1cm；

（6）包装灭菌

在无菌的状态下进行包装，一层采用特卫强纸、另一层采用聚乙烯塑料，包装完成后采用环氧乙烷进行灭菌。

9.根据权利要求8所述的一种人工生物肌腱的制备方法，其特征在于：所述步骤（1）中近交系动物为近交系猪。

10.根据权利要求9所述的一种人工生物肌腱的制备方法，其特征在于：所述近交系猪为中国近交系五指山小型猪。

11.根据权利要求8所述的一种人工生物肌腱的制备方法，其特征在于：所述步骤（2）中过氧乙酸的体积百分含量为0.1%。

12.根据权利要求8所述的一种人工生物肌腱的制备方法，其特征在于：所述步骤（2）中灭活时间为1h。