[发明专利]一种检测替诺福韦二乙酯含量的高效液相检测方法

说明书

技术领域

本发明属于医药技术领域，具体涉及一种检测替诺福韦二乙酯含量的高效液相检测方法。

背景技术

富马酸替诺福韦酯是一种新型核苷酸类逆转录酶抑制剂。其活性成分替诺福韦双磷酸盐可通过直接竞争性地与天然脱氧核糖底物相结合而抑制病毒聚合酶，也可以插人DNA中终止链，故其可以与核苷类逆转录酶抑制剂类似的方法抑制逆转录酶，从而具有潜在的抗HIV-1活性。替诺福韦是美国吉利德(Gilead)公司开发上市的一种核苷酸类抗病毒药。2001年经美国FDA批准用于治疗人免疫缺陷病毒（HIV）的感染。由于治疗效果确切，适用性好，剂量合适，是多个治疗指南推荐使用的一线抗HIV药物。因此，富马酸替诺福韦酯作为替诺福韦酯的前体物在抗艾滋病药物市场具有巨大的前景与市场。

替诺福韦二乙酯是制备富马酸替诺福韦酯的中间体，很多公司也将其作为制备富马酸替诺福韦酯的起始原料。目前，仅有美国药典论坛上记载了用于富马酸替诺福韦酯质量检测的方法，但此方法不能对替诺福韦二乙酯进行有效检测，而国内外也未见用于有效检测替诺福韦二乙酯的方法。因此，建立准确检测替诺福韦二乙酯含量的方法具有非常重要的意义。

发明内容

本发明提供了一种用于检测替诺福韦二乙酯含量的高效液相检测方法，该方法通过高效液相的方法测定富马酸替诺福韦酯中间体替诺福韦二乙酯的含量，该方法简便、专属、准确，适用于工业化生产的中间体快速检测。

本发明的目的是这样实现的：1、一种检测替诺福韦二乙酯含量的高效液相检测方法，其特征在于该检测方法包括如下步骤：

（1）色谱条件

色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；

柱温：20-40℃；

检测波长：262nm；

流动相：醋酸盐缓冲液和有机相组成；

所述流动相中醋酸盐缓冲液的浓度为0.01-0.02mol/L，pH 为3.6~4.0，有机相为甲醇或乙腈；所述醋酸盐缓冲液与有机相的体积比为9-33:11；

（2）供试品及对照品溶液的制备：取供试品，精密称定，加流动相制成0.15mg/ml的溶液，作为供试品溶液；另取替诺福韦二乙酯物对照品，精密称定，同法制备，作为对照品溶液；

   （3）测定方法：分别精密量取对照品溶液和供试品溶液，注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算；供试品溶液主峰与对照品溶液主峰的保留时间一致；

计算公式：

C_X为供试品的含量，   

  C_R为对照品的含量，

A_X为供试品的峰面积，

A_R为对照品的峰面积，

W_X为供试品的称样量，单位：mg，

W_R为对照品的称样量，单位：mg。

由上所述，醋酸盐缓冲液为醋酸铵、醋酸钠缓冲液；所述的醋酸盐缓冲液的pH为3.8；所述流动相中醋酸盐缓冲液与有机相的体积比为65:35。

与现有技术相比，本发明的优点在于：建立了一种用于测定富马酸替诺福韦酯中间体替诺福韦二乙酯含量的高效液相检测方法。本检测方法可准确测定替诺福韦二乙酯含量；本法灵敏度高专属性强，定量限可达0.04μg/ml；可有效检测替诺福韦二乙酯含量，控制泰诺福韦替诺福韦二乙酯质量，以合成质量合格的富马酸替诺福韦酯。

附图说明

附图1是替诺福韦酯二乙脂色谱图。

具体实施方式

下面将通过实例对发明作进一步详细说明，但下述的实例仅仅是本发明其中的例子而已，并不代表本发明所限定的权利保护范围，本发明的权利保护范围以权利要求书为准。

实施例1

1 色谱条件的选择

1.1检测波长的选择  

取替诺福韦二乙酯适量，加流动相溶解并稀释制成0.15mg/ml溶液。由附图1中的DAD图谱显示，替诺福韦二乙酯在262nm有最大吸收，故选择262nm为检测波长。

1.2 色谱柱的选择  

选择十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱两种反相色谱柱。不同反相色谱柱的保留行为见表1。

 

结果显示，采用十八烷基硅烷键合硅胶为固定相的色谱柱均可用于测方法检测。

1.3 柱温的选择

对高效液相色谱法常用的柱温进行考察，结果见表2。