[发明专利]酶法合成氨基酸神经肽的前体二肽

权利要求书

1.在非水介质中酶法合成氨基酸神经四肽Phe-Arg-Trp-Gly(FRWG)的前体二肽BOC-Phe-Arg-OMe，以胰凝乳蛋白酶(ChyT)作为催化剂在水-有机溶剂体系中催化合成、分离纯化、鉴定目标二肽。

2.根据权利要求1所述特征在于BOC-Phe-Arg-OMe的酶促合成：加入BOC-Phe；Arg-OMe；有机溶剂；一定量的Tris-HCl缓冲液；三乙胺；酶。水浴振荡，加入三氯乙酸(TCA)终止反应，用质谱检测产物的生成和HPLC分析。

3.根据权利要求1所述特征在于肽产物分离纯化：产物二肽BOC-Phe-Arg-OMe的分离纯化采用Sephadex G-10分子筛凝胶柱层析。取Sephadex G-10干柱料，加蒸馏水浸泡过夜，减压除气泡后装柱。洗脱液平衡过夜。待分离液体0.5ml上样层析。检测波长：220nm，流速：1.0ml/min，收集产品峰，冻干得产物。

4.根据权利要求1所述特征在于肽产物的鉴定：产物的鉴定主要使用质谱确定分子量的方法。酶促肽合成因其条件温和，催化专一性强，故基本没有氨基酸内部共价键的断裂，而且由于使用N端保护氨基酸为底物，基本避免了与目标产物氨基酸顺序相反的副产物的产生，因此通过确定分子量的方法就可以鉴定产物。质谱(MS)条件如下：离子化模式：API-ES；极性：阳性；电压：4000V；喷雾器压力：35psig；烘干气流：10L/min；温度：350℃；扫描范围：100-600a.m.u.(atomic mass units)。