[发明专利]一种猪精液常温保存的稀释液及其制备方法

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及动物精液的常温保存稀释液，特别涉及一种猪精液常温保存的稀释液及其制备方法。

背景技术

随着猪的人工授精技术在集约化养猪场中的推广与应用，精液保存技术越来越受到重视，并日益显示出其在降低公猪饲养量和饲养成本、加快猪群品种改良、减少疾病传播等多方面的优势。与冷冻精液相比，常规液态保存精液具有繁殖成绩好（受胎率、分娩率和窝产仔数高）、所需费用低、操作程序简单等优点，从精液的保存效果考虑，后者更有利于猪的繁殖，能产生更大的经济效益。因此，猪的人工授精主要采用常温保存的精液。

猪精液常温保存是将采集的精液保存在具有一定变动范围的室温下，利用一定范围的酸性环境抑制精子的活动，减少其自身的能量消耗，使精子保持在可逆的状态而不丧失其受精能力。在精液常温保存中，精液的保存效果受保存温度、pH、渗透压、稀释倍数、活性氧等多方面因素的影响，稀释液不仅能为精子提供代谢所需的能量，调整pH和渗透压，还可以抑制精液中微生物的繁殖，起到保护精子的作用。因此，稀释液是影响猪精液常温保存效果的关键因素。

牛血清白蛋白（英文别名：BSA），在酶切反应缓冲液中加入BSA，通过提高溶液中蛋白质的浓度，对酶起保护作用，同时也是一种蛋白类保护剂。相关研究表明，BSA可有效地延长精液保存时间的同时，能提高保存后精子的受精能力。国外有关研究认为，BSA可以通过多种途径对精子起到保护作用，一是去除精子膜中的部分胆固醇和锌，调整精子膜的脂肪水平，从而改变了精子膜的稳定性；二是克服冷却过程中产生的溶血磷脂和自由脂肪酸造成的Ca²⁺易进入胞内的性质；三是中和精子和细菌代谢副产物，起一定缓冲作用和抗氧化作用；四是弥补稀释造成的精清中蛋白类运动激活物的下降，维持精子的运动；五是减少稀释造成的精子头部带相反电性电荷所引起的头对头凝集。BSA在牛羊精液保存中应用较多，并且取得了较好的效果。但是在猪精液常温保存中的系统研究及最适添加浓度还未见报道。

另外，目前国内外猪精液稀释保存配方种类很多，大多存在应用效果不一、成本过高的缺点，给生产场和基层品种改良站及专业户带来很多不便。因此，深入系统地研究影响猪精液常温保存的因素，研发适合我国猪精液保存的稀释液，对我国猪的人授精技术的发展具有非常深远的影响。

发明内容

针对目前我国猪精液稀释粉常温保存时间较短、保存效果较差的缺陷，本发明的目的在于，提供一种猪精液常温保存的稀释液及其制备方法，以探索BSA在猪精液常温稀释液中的最适添加浓度。

为了实现以上目的，本发明采取如下技术方案：

一种用于猪精液常温保存的稀释液，其特征在于，制得的该用于猪精液常温保存的稀释液为水溶液，每100mL水溶液中含有下列物质：

葡萄糖：2.75g，EDTA-Na2：0.235g，柠檬酸三钠：0.69g，柠檬酸：0.29g，碳酸氢钠：0.1g，Tris：0.565g，庆大霉素：4万IU，牛血清白蛋白：0.4g。

上述用于猪精液常温保存的稀释液，应现用现配，最好是在精液稀释前至少2h进行配制。

上述用于猪精液常温保存的稀释液的制备方法，其特征在于，包括下列步骤：

1）按配方称取葡萄糖、EDTA-Na2、柠檬酸三钠、柠檬酸、碳酸氢钠、Tris、牛血清白蛋白、庆大霉素备用；

2）将葡萄糖、EDTA-Na2、柠檬酸三钠、柠檬酸、碳酸氢钠、Tris、牛血清白蛋白用100mL双蒸水配制成水溶液；

3）待水溶液中的各成分充分溶解后，用0.22μm的滤器进行过滤，除菌。

使用前，加入配方量的庆大霉素，得到用于猪精液常温保存的稀释液。

本发明制备的用于猪精液常温保存的稀释液，pH为7.05±0.05、渗透压为300mOsm。稀释液的保存效果良好且可靠，能够为猪人工授精提供高质量的优质常温保存精液，具有十分广阔的市场应用前景。

附图说明

图1是不同浓度的BSA对精液中T-AOC的影响

图2是不同浓度的BSA对精液中MDA浓度的影响

下面结合附图和发明人给的具体试验和使用方法，对本发明作进一步的详细说明。

具体实施方式

在以下的实施例中，猪精液常温保存的稀释液需现用现配。

试验例：杜洛克猪精液常温保存

（一）猪精液常温保存的稀释液配制