[发明专利]一种枯草菌脂肽及其钠盐的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及微生物领域，特别涉及一种枯草菌脂肽及其钠盐的制备方法。

背景技术

表面活性剂是指能显著降低溶剂表面张力和液-液界面张力，并具有一定结构、亲水亲油特性和特殊吸附性能的物质。表面活性剂分子的结构具有一端亲水、一端亲油的不对称结构，溶解于水以后，表面活性剂能降低水的表面张力，并提高有机化合物的可溶性。根据化学结构的不同，表面活性剂分为离子型表面活性剂、非离子型表面活性剂和特殊类型表面活性剂。特殊类型表面活性剂又分为Gemini表面活性剂、生物表面活性剂、元素表面活性剂和高分子表面活性剂。其中，生物表面活性剂是一种新兴的表面活性剂，它是利用生物技术提取的一种两亲结构的物质，主要由发酵和酶法途径生产，除具有化学表面活性剂相同或相近的理化特性外，还具有结构多样性、较低的毒性、生物可降解性、良好的生物相容性、极强的乳化性、良好的起泡性以及生产成本低廉等诸多优点，并且对极端的温度、pH和盐浓度有较高的选择性和专一性，因此，在环保、石油开采、高端化妆品、医药、食品加工等领域具有较大的应用研究价值。

枯草菌脂肽（Surfactin）及其钠盐为生物表面活性剂的一种，Surfactin自1968年被Arima等人首次发现以来，一直是表面活性最强、研究最多的生物表面活性剂之一。Surfactin在20μmol/L浓度下即可使水的表面张力从72mN/m降低到27mN/m，水和正十六烷体系的界面张力从43mN/m降到1mN/m以下，其临界胶束浓度值为7×10^－5mol/L。除了具有较强的表面活性外，Surfactin还能增加憎水烃类的可生物降解性，在受烃类污染土壤和海洋的生物修复中发挥重要作用，它还能与部分重金属结合而移除受污染土壤和沉积物中的重金属，并具有一定的抗菌活性。

Surfactin及其钠盐是由枯草芽孢杆菌经发酵合成，利用现有的制备方法生产Surfactin时，酸化粗产物的产量较低，粗产品中含有较多的残糖、中间体、蛋白质和氨基酸等杂质，这些杂质的存在增加了分离纯化的难度，需要投入大量的资金和人员，很难应用于工业化生产。因此，提供一种高产、杂质含量低的枯草菌脂肽及其钠盐的制备方法具有重要的现实意义。

发明内容

有鉴于此，本发明提供了一种枯草菌脂肽及其钠盐的制备方法。该方法通过优化发酵时间，提高了枯草菌脂肽的产量，减少了粗产品中杂质的含量，从而降低了分离纯化的难度，适于工业化生产。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了一种枯草菌脂肽及其钠盐的制备方法，获得保藏编号为CGMCC No.1107的枯草芽孢杆菌菌株E8种瓶培养物，取保藏编号为CGMCC No.1107的枯草芽孢杆菌菌株E8种瓶培养物接种于发酵培养基，培养57～168h，经纯化，即得。

作为优选，培养的时间为73～168h。

作为优选，枯草芽孢杆菌菌株E8种瓶培养物的接种量为发酵培养基体积的1.0～5.0%。

作为优选，培养的温度为30～40℃。

作为优选，培养的转速为150～350r/min。

作为优选，发酵培养基包括葡萄糖或麦芽糖30～50g/L、可溶性淀粉或糊精30～50g/L、L-谷氨酸钠15～25g/L、磷酸二氢钾0.5～2g/L、酵母提取物0.2～5g/L。

作为优选，发酵培养基的pH值为7.0～7.2。

作为优选，保藏编号为CGMCC No.1107的枯草芽孢杆菌菌株E8种瓶培养物的制备方法包括：

取保藏编号为CGMCC No.1107的枯草芽孢杆菌菌株E8，接种于母斜面培养基，在30～40℃条件下培养24～90h，获得一级种子，4℃保藏1～20d；

取（0.2～2.0）×（0.2～3.0）cm²的一级种子接种于子斜面培养基，在30～40℃条件下培养24～90h，获得二级种子，4℃保藏1～20d；

取（0.2～1.0）×（0.2～2.0）cm²的二级种子接种于种瓶培养基，在30～40℃、150～350r/min条件下培养12～24h。

作为优选，母斜面培养基包括牛肉膏2～8g/L、蛋白胨5～15g/L、氯化钠2～8g/L、琼脂粉10～25g/L。

作为优选，母斜面培养基的pH值为7.0～7.2。

作为优选，子斜面培养基的配方与pH值可与母斜面培养基的配方与pH值相同。