[发明专利]人源性耐药GH型垂体瘤细胞株及其建立方法和用途

说明书

技术领域

本发明属生物技术、微生物动物细胞系领域，涉及人肿瘤细胞，具体涉及一种人源性耐药GH型垂体瘤细胞株（huashanc-GH），尤其涉及国际首例人源性耐药GH型垂体瘤细胞株（huashanc-GH）及其建立方法和用途。

背景技术

研究显示，垂体瘤是一组从垂体前叶和后叶及颅咽管上皮残余细胞发生的肿瘤，约占颅内肿瘤的10～15％；其中，生长激素型垂体瘤因生长激素(Growth Hormone，GH)过度分泌引起肢端肥大症（Acromegaly）。据报道，端肥大症为一类严重的神经内分泌疾病，该疾病由生长激素过度分泌引起胰岛素样生长因子-I（Insulin-like Growth Factor-1，IGF-1）异常升高所介导，该异常作用于全身多个脏器和系统，引起五官粗大、肢端过度生长、头痛、乏力、软组织肿胀、多汗、骨关节痛、腕管综合征、下颌凸出、咬合不正、打鼾、睡眠呼吸暂停、高血压、心肌肥厚、心衰、糖代谢紊乱等典型症状和体征，最终导致患者死于严重的心肺及其它重要脏器并发症。根据既往流行病学资料显示，肢端肥大症的年发病率及患病率分别为3~4/百万人和40~125/百万人，而当引入IGF-1检测，结果显示，其年发病率高达1034/百万人；所述患者的死亡率较正常人群增加2~2.5倍，并且由于该疾病具有隐匿进展的特点，通常确诊时往往已经延误了7~10年，因此，肢端肥大症成为一类严重威胁青壮年生命建康的神经内分泌疾病。

目前，临床治疗实践中，对于GH型垂体瘤的治疗方案主要包括：①手术治疗；②药物保守治疗；③放射治疗，包括放疗及伽马刀；④实验性化疗药物治疗；⑤改善心肺功能等在内的对症治疗等。但从临床效果来看，所述药物治疗病例中有相当一部分GH瘤患者存在耐药现象；而若采用手术治疗，则由于约25%的垂体瘤有显著的硬膜侵犯和侵袭而无法实施全切，导致部分患者手术部分切除后遗留难以恢复的内分泌症状。

有研究指出，垂体瘤治疗效果欠佳的主要原因是对垂体瘤的发生、发展及耐药机制等尚不够清楚。目前，关于垂体GH瘤的耐药机制有三种假说：①肿瘤细胞上生长抑素受体缺失、密度降低，或是受体的异构体表达；②受体的基因突变导致产生无功能生长激素受体；③因为信号的级联反应导致受体脱敏。迄今为止，本领域对其病理机制不能确定的主要原因之一在于尚缺乏能稳定传代的人源性垂体瘤细胞株作为实验对象。

本领域知悉，肿瘤细胞系/株是研究肿瘤细胞成瘤及后续功能实验的基础，细胞系/株可作为有效的模型用以评估不同激素的合成与释放的控制，探究细胞增殖、肿瘤形成的复杂过程以及不同药物因素对这些过程的影响机制。对于垂体瘤来说，因为缺乏相应的细胞系/株，导致：①对于已知或新发现的垂体瘤相关基因及蛋白的分子机制无法进行更深入的探讨；②影响垂体瘤新药的体外试验和研发；③垂体瘤新的生物治疗手段在体内试验之前，无法进行体外细胞学研究；④无法开展垂体瘤耐药性检测等等。因此，建立垂体瘤细胞株模型，利用该细胞系进行脑垂体瘤发病及耐药性机制研究，新药研发、生物治疗新技术及相关生物工程产品的检测意义重大。

鉴于人垂体肿瘤绝大多属良性，其培养比其他肿瘤细胞更为困难，迄今为止，尚未见有关人垂体腺瘤细胞建株的报道。

发明内容

本发明目的在于克服现有技术的不足，提供一种人源性耐药GH型垂体瘤细胞株（huashanc-GH），尤其涉及国际首例人源性耐药GH型垂体瘤细胞株（huashanc-GH）及其建立方法和用途，进一步建立人垂体瘤细胞系，以用于研究脑垂体瘤发病机制、研发新药、检测耐药机制、生物治疗新技术及相关生物工程产品等。

本发明的人源性耐药GH型垂体瘤细胞株（huashanc-GH）通过临床耐药GH型垂体瘤患者的垂体瘤细胞分离培养获得，获得的人源性耐药GH型垂体瘤细胞株（huashanc-GH）经体外培养维持半年，传代至50余代，命名为人源性耐药GH型垂体瘤细胞株（huashanc-GH）；经GH检测，结果显示，细胞株huashanc-GH可稳定持续分泌GH，最高值：338ng/ml,最低值147ng/ml（如图6所示），结果表明，huashanc-GH在体外培养中保持其生物分泌活性。

本发明所述人源性耐药GH型垂体瘤细胞株（huashanc-GH）具有下述生物学特性：

（1）大多呈圆形或椭圆形，胞浆丰富，核大，圆形；

（2）稳定传代，首次传代50代以上；

（3）持续分泌生长激素（GH）； 

（4）对生长抑素类似物(SA)耐药。