[发明专利]一种中药制剂注射用双黄连中多种成分含量测定方法

说明书

技术领域

本发明涉及双黄连中多种成分含量测定方法。

背景技术

注射用双黄连，是由金银花、黄芩、连翘三味药材的提取物制成的天然药物注射剂。其主要成分为连翘苷（phillyrin）、芦丁（rutin）、黄芩苷（baicalin）、千层纸素-7-O-葡萄糖醛酸苷（OroxylinA-7-O-gluacid）、汉黄芩苷（Wogonoside）、黄芩素（baicalein）、汉黄芩素（wogonin）、连翘酯苷A（Forsythoside A）、新绿原酸（5-Caffeoylquinic acid）、绿原酸（3-Caffeoylquinic acid）、隐绿原酸（4-Caffeoylquinic acid）、异绿原酸A（3,5-Dicaffeoylquinic acid）、异绿原酸B（3,4-Dicaffeoylquinic acid）、异绿原酸C（4,5-Dicaffeoylquinic acid）等。具有抗病毒及抗菌双重治疗作用，对于流感等20余种常见病毒有明显作用，其抗菌作用有别于其他常用的抗感染药物，尤其是对抗生素耐药性细菌感染的治疗更具优势，从临床的总体效果来判断是安全、有效的、不良反应少。其抗菌作用有别于其他常用的抗感染药物，注射用双黄连这一结合了中国传统文化与现代技术的产物，目前已成为全国临床治疗肺炎、上呼吸道感染、急性支气管炎等多种疾病的常用药物之一。

注射用双黄连作为中药注射剂质量控制的典范被载入中国药典，并且较科学的对分别来源于连翘的连翘苷、金银花的绿原酸以及黄芩中的黄芩苷分别进行含量控制，并对这三种成分的含量规定上下限度，对保证药品质量和临床疗效的稳定具有重要意义。但注射用双黄连上市近20年时间，这些控制手段也是在不同时期逐步完善的，这些含量测定包括最后增加的指纹图谱，分别采用独立的含量测定方法，采用不同的流动相系统；不同的供试品制备方法，不同的检测波长进行检测，三种成分含量测定加上指纹图谱检测，单针仪器仅样品检验运行时间接近2小时（见附图1-4），有的检验条件有一定弊端（见附图5），同时在药品制备过程中的原料、中间体、半成品、成品的控制等，使得检验人员、设备的占用量巨大，检验试剂使用量巨大，同时产生的检验废液及废液处理费用较高。

目前，有关双黄连含量测定的方法，能将绿原酸、黄芩苷、连翘苷三者同时测定，均存在含量较小的连翘苷与含量较大的黄芩苷同时检测，要较稳定地检测连翘苷必须采用较大浓度的供试品，通用色谱柱分离时将较长等问题，例如孙永慧等在《中成药》（2010.32:65-68）中公开的文章《HPLC同时测定双黄连粉针剂中5种成分的含量》所提供的方法，可对上述部分部分问题进行克服，但该方法仍有部分问题，如样品浓度较大（4mg/g），导致标准品黄芩苷样因浓度较高有溶解困难和析出现象；另外样品采用水溶液制备导致样品中的部分成分在放置一段时间后（10小时以上，尤其是夏天）有衰减现象；甲醇水系统梯度洗脱采用低波长检测（如208nm）基线有漂移现象；每一次进样运行时间为1小时，占用设备和检验周期仍然较长。

发明内容

本发明的目的是为了解决现有注射用双黄连质量检验过程中存在一个样品需要采用不同的方法处理，用不同的条件检测，部分样品处理方法复杂存在弊端，不能充分体现指纹的完整性，检测成本高、产生的废液多，占用大量的人员、设备，检验周期较长的问题，而提供了一种中药制剂注射用双黄连中多种成分含量测定方法。

本发明的一种中药制剂注射用双黄连中多种成分含量测定方法，是按照以下步骤进行的：

一、黄芩苷对照品的制备：取黄芩苷对照品，加入缓冲盐溶液制成浓度为0.5mg/mL的溶液，作为黄芩苷对照品；

二、混合对照品溶液的制备：称取对照品，加入缓冲盐溶液制成每1mL含10μg的新绿原酸、40μg的绿原酸、8.0μg的隐绿原酸、4.0μg的异绿原酸A、10.0μg的异绿原酸C、8.0μg的连翘苷、20μg的千层纸素-7-O-葡糖醛酸苷、3.0μg的汉黄芩苷、2.0μg的黄芩素和0.6μg的汉黄芩素的溶液，作为混合对照品；

三、供试品溶液的制备：取中药制剂注射用双黄连供试品，加入缓冲盐溶液制成浓度为2mg/mL的溶液，作为供试品；

四、测定条件：采用甲醇-磷酸水溶液系统或者乙腈-磷酸水溶液系统梯度洗脱方法进行洗脱，采用多波长同时监视或随时间变更波长进行监测；采用HPLC和UHPLC兼容的快速分析柱。

本发明包含以下有益效果：