[发明专利]趋化因子诱饵受体CCX-CKR在结直肠癌中的表达的评估模型的建立方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种受体，特别涉及一种趋化因子诱饵受体CCX-CKR在结直肠癌中的表达的评估模型的建立方法。

背景技术

结直肠癌是全球第三的常见的恶性肿瘤，并占肿瘤引起的死亡的第四位。远处转移是结直肠癌患者死亡最主要的原因。未转移结直肠癌患者5年生存率为80%-90%，但发生远处转移时5年生存率仅为10%-20%。尽管有大量的分子已经被证实参与肿瘤的转移，肿瘤转移的具体机制仍不是很清楚。

趋化因子及趋化因子受体通过调节肿瘤细胞生长、肿瘤血管生成、肿瘤淋巴细胞侵润参与了肿瘤转移。CXCR4/CXCL12(SDF-1)轴是肿瘤转移相关趋化因子轴中研究最为广泛的，参与了人体多种恶性肿瘤的转移包括乳腺癌、前列腺癌、卵巢癌、结直肠癌等。除了CXC4/CXCL12(SDF),研究证实CCR7/CCL19(CCL21)，CCR9/CCL25，CXCR5/CXCL13等相互作用也参与了结直肠癌的转移。

CCX-CKR能够结合和清除相应的配体CCL19，CCL21，CCL25，CXCL13。这些趋化因子分别与CCR7，CCR9以及CXCR5相互作用，参与肿瘤的细胞的转移。Zeng等报道CCX-CKR在侵润性乳腺癌中的表达与淋巴转移和肿瘤分期成显著的负相关关系，并且是乳腺癌无复发生存率的有利因素。Zhu等研究报道CCX-CKR与胃癌总生存率有关，但CCX-CKR在结直肠癌未有报道。

发明内容

针对上述问题，本发明提供一种趋化因子诱饵受体CCX-CKR在结直肠癌中的表达的评估模型的建立方法，以解决现有技术中的在结直肠癌领域研究空白的问题。

为了实现上述目的，本发明的技术方案如下：

趋化因子诱饵受体CCX-CKR在结直肠癌中的表达的评估模型的建立方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）准备组织样本

（1.1）收集标本

标本包括结直肠癌组织及配对的正常结直肠组织，将离体后的标本立即固定于10%福尔马林缓冲液中并进行石蜡包埋；

其中，所述标本的供体在术前未进行过化疗或者放疗治疗。手术切除肿瘤后，根据结直肠癌治疗指南，给予化疗或放疗治疗。

（1.2）制作组织芯片

每个标本都经组织病理学诊断后，制成组织芯片；

（2）免疫组织化学染色

包含有结直肠癌组织及毗邻正常结直肠组织的组织芯片被用于检测CCX-CKR蛋白的表达，通过亲和素-生物素-免疫过氧化物酶方法；

其中，CCX-CKR染色在显微镜下，由两个独立的操作员进行评分，并且两个操作员不知道预后。

染色结果采用染色比例得分与染色强度得分的乘积；

其中，所述染色比例得分为：0分为0%，1分为>0%-≤25%，2分为>25%-≤50%,3分为>51%-≤75%，和4分为>75%。

其中，所述染色强度得分为：0分为否定结果(negative result),1分为弱的(weakly positive),2分为中等的(moderately positive)和3分为强的(strongly positive)

其中，所述染色结果的评分低于6分评估为低表达，而大于等于6分评估为高表达。

（3）统计学分析

卡方检验用于统计CCX-CKR表达与临床病理参数的关系，Kaplan-Meier曲线用于统计患者的总生存率，组之间的统计意义用log-rank test评价；

其中，所述统计学分析采用SPSS12.0软件,P值小于0.05。

本发明的有益效果：

通过本发明的方法，得出结直肠癌组织中CCX-CKR表达明显低于正常结直肠组织。CCX-CKR表达上调与结直肠癌淋巴结转移负相关，并与结直肠癌早期TNM分期显著相关。CCX-CKR表达上调提示结直肠癌患者术后拥有更高的总生存率，从而在临床实践中给予患者更为准确的预后判断。

附图说明

图1A为缺失的结直肠癌组织中CCX-CKR表达情况。

图1B为缺失的正常结直肠组织中CCX-CKR表达情况。

图2A为弱的结直肠癌组织中CCX-CKR表达情况。

图2B为弱的正常结直肠组织中CCX-CKR表达情况。

图3A为中等的结直肠癌组织中CCX-CKR表达情况。

图3B为中等的正常结直肠组织中CCX-CKR表达情况。