[发明专利]一种利用组织培养技术繁殖平贝母的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种组织培养方法，具体涉及到一种平贝母的繁殖方法。

背景技术

平贝母，别名平贝、北贝、贝母，为百合科多年生草本，高达1m。平贝母的干燥鳞茎是我国常用的中药材，具有清热润肺、化痰止咳、散结等功能，在临床上用于痰热咳嗽、咳痰带血、瘰疬疮疡肿毒等疾病的治疗。近年来，由于过度采挖，资源逐年减少，商品供不应求，价格不断上涨。

目前对贝母的组织培养研究已经有了一定的规模，但是鉴于技术的问题一直存在着一些问题，对平贝母的快速繁殖技术也已经有一定的研究，但是对平贝母的需求日益增加，目前平贝母的繁殖和种植远远达不到人们的需求，组织培养可以大大提高平贝母的繁殖率，但是目前组织培养体系尚未充分建立，存在一些技术上的问题，优良品种的推广普及尚未完成，供求矛盾日益加剧，严重影响了平贝母的大量繁殖。

发明内容

本发明针对目前存在的问题，提供一种能够快速、有效的利用现有资源繁殖平贝母的方法。

为了解决上述技术问题，本发明采用的一个技术方案是：

一种利用组织培养技术繁殖平贝母的方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）外植体的选择与消毒：首先选择当年生长健壮、无霉烂斑点的新鲜平贝母，剪去根及有伤鳞片，流水冲洗30 min后放入清水中浸泡15min，再用50％多菌灵500倍液浸泡20~30 min或者用50％福美双粉500倍液浸泡10~15min，然后将种球鳞片剥下，用紫外灯照射10 min，转入超净工作台，再用75%酒精消毒50 s，无菌水冲洗2~3次，再用6%次氯酸钠溶液消毒10 min，无菌水冲洗2~3次。最后用0.2%的升汞溶液消毒10 min，无菌水冲洗4~5 次。

（2）材料处理：首先在超净工作台上，在无菌条件下， 切去鳞片上部1/3，然后将中、下部分割开来，将鳞片和鳞茎基部分别切成6-8mm的小块； 

（3）初代培养：在无菌的条件下将步骤（2）得到的外植体接种在初代培养基上，该培养基是在在3/4MS常规培养基中添加了0.8mg/L的6-BA、1.2mg/L的NAA，30-40mg/L的蔗糖和0.4-0.8mg/L的ZT；PH为 6.0，培养温度为24℃，光照时间12 h/d，光照强度2 000 Lx，琼脂5 g/L，经过25-30天形成愈伤组织；

（4）继代培养：将初代培养的愈伤组织切下接种在继代培养基上，该培养基是在MS常规培养基中添加了0.5mg/L的6-BA、0.3mg/L的IBA、0.3mg/L的KT和20mg/L的蔗糖，PH 6.0，培养温度为24℃，光照周期13h/d，光强度为2200lux，经过7-12天时间分化出绿点后，即开始下一阶段；

（5）小鳞茎的增殖：将分化出绿点的愈伤组织继续培养，该培养基是在1/2MS常规培养基中添加了40mg/L的蔗糖、0.3mg/L的KT、0.4mg/LNAA和0.2mg/L的ZT，PH 6.0，培养温度为24℃，光照周期13h/d，光强度为2200lux，经10-15天培养便可分化出丛生小鳞茎；

（6）生根培养：将分化出来的小鳞茎接种于下列诱导培养基中进行生根诱导：1/2 MS培养基、0.3mg/L的KT、1mg/L的活性炭、7-8g/L的琼脂、0.5mg/L 的NAA，培养温度为24℃，光照周期13h/d，光强度为2200lux，经过8-12天待小鳞茎长至2.5cm高，根系比较发达时，即开始下一个阶段；

（7）炼苗移栽：先将培养瓶移至温室，自然条件下炼苗6d，然后将长出新根的小鳞茎从培养瓶中取出，在阳光下晒1-2天，在晒的过程中要适当遮光，使光照强度为自然光的50%，温度在15℃左右，当培养基表面成龟裂状后，取出小苗洗净根部附着的培养基，移栽到经消毒的腐殖土∶草炭∶珍珠岩：蛭石=2∶2∶1：3 （重量比）的混合基质中，温度控制在25℃左右。

本发明的有益效果主要体现在：

（1）建立了完善的平贝母的离体组织培养快速繁殖的成套技术，达到了高效诱导外植体分化增殖目的，并且保存了母体的全部优良性状，遗传性状稳定；

（2）缩短了繁殖周期，在保证了成活率的基础上，提高了繁殖效率，增加了经济效益；

（3）在不同的培养阶段的利用不同的激素进行调节，对培养基配方的精确筛选达到试管苗生长旺盛的优良效果，并且结合有效的灭菌技术，达到提高增殖率和减少变异的目的。

（4）在继代培养后的小鳞茎的增殖过程中适当更换了培养基，更有利于小鳞茎的快速生长。